为了证实前面的信息是如何应用于实验室，下面将以实例进行描述。此实例是关于血清葡萄糖测定方法的评价。

 (一)分析需求

在常规工作时间以外的时间需要快速方法确定血清葡萄糖。样本体积为0.2 ml 或更小，分析范围为0-27.5 mmol/L ，及周转时间为20 minX对于急诊特定样本申请是期望的。短的周转时间意味着由于糖酵解作用葡萄糖的损失将没有意义。

    (二)质量目标

葡萄糖分析的医学决定性水平认为是2. 75mmol/L 和11 mmol/L分别指示为低血糖和高血糖。因为程序用于第一班工作时间以外，没有包括通常用于筛查(6.93 mmol/L) 的决定性水平。葡萄糖精密度目标(见表1-2-10 )定为在2.75 mmol/L时的0.0825 mmol/L 和在11 mmol/L时的0.275mmol/L。总误差目标( TEa) 是2.75 mmol/L时的0.33 mmol/L 和11 mmol/L时的1.1 mmol/L。

(三)方法选择

对可提供方法的调查后，选择的试验方法以试剂盒方式提供，可用于建立在现在的实验室仪器。指派专门检验人员执行评价研究，并规定具体的实验时间。

(四)熟悉时期

获得试剂盒和一级参考物质后，建立方法并运行。一级参考、溶液用于校准。实验控制物和随机选择的临床标本进行几批的检测。从贮备的葡萄糖一级参考溶液(55 mmol/L) 制备一系列的葡萄糖溶液进行双份检测来确定线性范围。图1-2-13 以图形方式表述结果。图形显示出到33 mmol/L 的良好的线性，其满足到27.5mmol/L 的线性规范。在零葡萄糖浓度的吸光度值是试剂空白值，其是可复现的及满意地低，以至于省去这一空白吸光度应不是误差的显著性来源。

(六)批内精密度

对每一低到不正常控制物和中度高到不正常控制物分析20 等份样本执行批内重复性试验。各自的平均值和标准差是低浓度控制物为(3 .11 ±0.0358) mmol/L，高浓度控制物为(10.04 ±0. 116) mmol/L。当与允许的标准差0.0825 mmol/L和0.275 mmol/L 进行比较时，这些标准差是可接受的。

(七)回收试验

制备两份不同浓度的血清样本作为基线标本。制备浓缩的葡萄糖溶液使得标准加入将不致使血清稀释明显。向9.6 ml 的血清中分别加入0 ， 100 ，400μl 具有浓度为55 mmol/L 的葡萄糖溶液，再分

别加入400 、300 、0μ1 0.15 mmol/L 的氯化钠溶液，对每一情况最后的体积为10.0 ml 。执行四次重复检测，并计算每一标本四个单独值的平均值(表1-2-13) 。通过测量值减去各自原血清葡萄糖含量

(3.355 mmol/L和9.405 mmol/L)确定回收量。百分回收是回收量除以加入量乘以100 获得。这些单个回收的平均值给出98%回收的估计，其相当于2% 的比例误差，或在2.75 mmol/L 时实际误差为0.055 mmol/L， 11 mmol/L 时实际误差为0.22mmol/L 。这些误差小于允许总误差，因此并不能使分析目标无效。

(八)检出限

通过重复地检测空白溶液获得的空白值 X_bt ,标准差S_bt，来估计检出限，计算出检出限位X_t:

X_t = X _bt + ks_bt

其中k 值为2 ，给出了95%的置信限。

(九)干扰

使用新方法和己知元这样干扰建立的方法同时检测一系列黄症、混浊和溶血的血请来检验明显不正常样本的潜在的干扰(表1-2 -14)。(注意这种方法不是经典的检验干扰的试验，经典的方法是直接加入干扰物质，并测量其效果。在此使用比较的方法是因为将这些物质加入到血清，因此存在一定的局限性。)两种方法在5.5 mmol/L到7.7 mmol/L 获得葡萄糖结果的差值是0.055mmol/L 到0.22 mmol/L，将其与允许总误差相比较判断其是可接受的。

通过加人少量高浓度的溶液到一大量血清中可检验其他可能的干扰。在6.6 mmol/L 浓度下与基线值的平均差值是0- 0.165 mmol/L (表1-2-15)。这些差值小于允许总误差，因此并没有限制方法的实用性。程序是否实用于肝素或其他类型血浆的检测也叮以通过适当地分割-些血样本来进行检验。

(十)日间精密度

每天分析两种质量控制血清共20天，得出的平均值和标准差分别为:低浓度平均值为2.890mmol/L ， 标准差为0.066 mmol/L;高浓度的平均值为10.150 mmol/L ；标准差为0.71 mmol/L。与可接受的标准差0.0825 mmol/L 和0.750 mmol/L 相比较，观察的不精密度分别是可接受的。

 

(十一)方法比较

证明可靠性的方法可用于比较的目的。由试验和比较方法同时双份检测114 份患者血清标本。对每一方法计算双份结果的平均值，并将试验方法的均值作为y 轴，比较方法平均值作为x 轴绘制图形(图1-2-14)。 该图显示的是葡萄糖浓度在分析范围内具有合理的分布。

回归分析给出如下统计数据:斜率=0.982 ， y 截距 =0.066 mmol/L , 标准差（Ｓ_y/x）= 0.231 mmol/L,相关系数=0.98 。这些统计量的解释如下:斜率接近于1.00，显示出的比例分析误差是1. 8%; 这种误差估计相当于在2. 75 mmol/L 为-0.0495 mmollL , 及在11 mmol/L 时的-0.198 mmol/L . y 轴截距接近于0 ，表明有0.066 mmol/L 大小的固定系统误差.数据离散或随机差值大小(两方法双份测定平均值之差)被估计为点围绕回归线的标准差为0.231mmol/L。这一统计量显示出双份测定平均值的差值覆盖范围0.440-0.495 mmol/L ，但是单个测量值之间的差值会稍高一些。相关系数的高值证实，已研究的浓度范围很宽，及指出简单线性回归对于分析这样一组数据是满意的。

基于这些数据，为了判断方法的可接受性，必须在决定性水平估计系统误差。例如，在2.75mmol/L决定性水平的系统误差为0.0165 mmol/L，Yc =0.066+ 0.982 x 2. 75 = 2. 77 。在11 mmol/L 决定性水平的系统误差为0.132 mmol/L ,yc =0.066+0.982 x 11 = 10. 87 。注意固定和比例分量是相反的方向，并且它们的效果在研究的浓度水平上稍微有些平衡作用。因此，系统误差是较小的，并且小于规定的允许总误差，当使用准确度时判断方法性能是可接受的。

为了应用总误差准则，对日间精密度标准差研究也应有要求(TE = SE + RE ， 其中RE 估计为4倍的日间标准差)。在2.75 mmol/L时的总误差为0.28 mmol/L ( 0.0165 + 4 x 0.066) ，在11 mmol/L时总误差为0.814 mmol/L (0.132 + 4 xO.17) 。与可允许的总误差( TEa) O. 33 mmol/L 和1.1mmol/L 相比较，这些观察的总误差也是可接受的。确定了分析性能是可接受的，需要执行其他的研究来确定试剂的稳定性和可复现性。对于选定的群体来验证参考区间，并且能期望接近参考方法的区间，因为它具有很小的系统误差。

对于其他的检测项目和非血清标本，执行的评价程序可能更严格。例如，当检测酶时，回收试验几乎是不可行的。对于昂贵的试验如免疫检测或复杂程序如电泳，分析人员可能处理少量的标本。对于脑脊液标本，由于提供的量有限，有些检测如精密度、干扰和样本交互作用可用参考溶液来模拟生物材料进行试验。但不管应用这些指南如何修改，基本的要求仍然是在方法引入到实验室之前必须由实际的试验建立方法的可靠性。

(选自操作规程第三版第一篇第二章 第三节 临床检验方法评价  第三节完)