美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）评价方案（EP）系列文件应用软件（EP Validator）的开发王治国 李小鹏
卫生部临床检验中心 100730
刘宗建 袁经剑
北京红桥科技发展有限公司 北京 100873
摘要: 美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）评价方案系列文件包括EP5-A(临床化学设备精密度性能的评价)，EP6-P （定量分析方法线性的评价），EP9-A（用患者样本的方法比较和偏差的估计），EP10-A（定量临床检验方法的初步评价）。这些标准化文件为临床实验室对方法学和仪器进行系统化的评价提供了非常有价值指南。这四种标准化文件对于数据统计分析要求很严格，并且其计算过程也较复杂，为了便于实验室更好地利用这些标准化的文件，为实验室服务，作者开发出了NCCLS评价方案系列文件应用软件（EP Validator）, 用户只需按照各标准化文件要求得出实验数据，并将数据输入到本软件中固定的格式中，就能很快地得出中间和最后统计分析结果。本软件运行于Windows 95或更高版本操作系统。
美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）评价方案（Evaluation Protocol,简称EP）系列文件，目前已普遍为临床实验用来对仪器、试剂及方法学进行系统化评价的文件。在此之前，实验室对方法学、仪器和试剂的评价采用一般评价方式，所采用的统计学方法也不规范化。自NCCLS 有了这些系列化的评价文件后，在方法学、精密度和线性的评价上有了一个为国际所接受的指南性文件来指导实验室工作人员进行相应的评价工作。
方法和原理
EP10-A文件是定量临床实验方法的初步评价（Preliminary Evaluation of Quantitative Clinical Laboratory Methods，Approved guideline）。此文件主要用于评价临床实验室定量分析方法的线性、偏差和不精密度，可用于对自动分析仪、试剂盒、手工操作或其他临床体外诊断方法的初步评价。其主要方法是对高、中、低三个浓度水平的样本按一定方式的排列，进行重复测定，通过作图和一些简单的计算，可对仪器（或方法）的上述性能进行初步评价。运用多元线性回归，可对影响精密度的因素（如携带污染、漂移等）进行进一步的分析。
当我们的实验室引进新设备、新分析方法时，需要对其进行简单的、初步的性能评价，以判断它是否符合要求。EP10-A文件恰好给我们提供了初步评价的方法，但这只是非常初步的整体性能评价，对初步评价满意的仪器或方法还需要对各具体性能（如精密度、线性等）按其他文件进行进一步的评价。
如果需要对测定系统的精密度进行系统的评价时，可采用NCCLS EP5-A：临床化学设备精密度性能的评价（ Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices; Approved Guideline）。本文件对如何对设备进行精密度评价作出系统的规定：一般要求是至少20天，每天两检测两批，每批中重复两次。 精密度评价实验的目的是评价设备的总精密度。直观地讲，总精密度就是这个设备在一个不定的长时间内的变异性。一些变异源在一定程度上影响长期精密度。通常在设计实验时要充分考虑所有这些影响总精密度的来源但不必去评价每个来源或内容的相对大小。用于描述与时间相关的总精密度内容包括:
(1) 批内 (2) 批间 (3) 日内 (4) 日间
其中批内精密度的内容与总精密度通常是最重要的。
EP6-P文件是定量分析方法线性的评价（ Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods）。本文件目前还是建议性文件，还不是批准性指南。线性是整个测定系统（包括测定方法中试剂或试剂盒、校准品、仪器、工作人员以及操作程序等）对应于系列分析物浓度（或活力）的仪器最终输出信号间是否恒定比例的性能。也可以是估计某曲线近似为直线的程度。这个性能评价对习惯于以一个标准校准后直线计算结果的做法显得更为重要。利用本文件作线性评价较为严格，结果可靠。以多组标准液绘制标准曲线时，每一标准液作多次重复测定。将所有结果绘制在座标纸上，目视判断具直线趋势后，用直线回归统计处理结果，得y=a+bx， 式中x为各标准系列浓度，y为仪器测定读数。同时也有回归线标准差。并还作一系列的统计检验。
EP9-A文件是用患者样本进行方法对比及偏差分析—批准指南（Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples; Approved Guideline）。此文件提供了对比实验方法：用患者血清标本，用两种方法（试剂或仪器）分别进行双份测定，然后将分析所得数据进行相关回归等分析，计算两方法间的偏差。
实验室工作中，常常会有一些新的方法、试剂或仪器投入使用，在使用这些新的方法、试剂或仪器之前，则需要对其进行一些评价，其中一项是和参考方法进行对比实验，以确定此方法测定的结果偏差在允许范围内。另外在用一种新方法取代旧一种方法时，也需要将两种方法进行对比实验，以确定两方法测定得到的结果相同或差异在允许范围内。进行对比实验时，就可以参考NCCLS文件EP9-A来进行。
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应用实例 下面仅以NCCLS EP9-A为例，对“用患者样品进行方法对比及偏倚估计”进行说明。 用户在使用本软的NCCLS EP9-A文件进行数据分析时，只要输入40个病人数据（见图1），选择本软件中的“评价”按钮，就可得到统计结果和图形（见图2和3）
图3. 分析评价后的偏倚图 EP5-A 应用实例：将40个数据输入到该文件的数据输入界面，然后选择“评价”按钮，即可得出各种标准差数据，并可将计算的不精密度与厂家声明的不精密度进行比较，从而可判断其不精密度是否符合厂家要求（见图4）。 
图4. EP5-A临床化学设备精密度性能的评价数据输入界面及计算结果 EP6-P应用实例： 进入到EP6-P文件界面，输入5个不同标准液每一浓度水平的4个重复测定结果到输入格式中，选择“评价”按钮，绘制出线性图，得出线性方程，并自动作出线性的评价（见图5）。
结论 本软件是完全按照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）评价方案系列文件开发出的数据分析处理软件（EP Validator）。该软件具有安装、操作简单。只需按照NCCLS文件要求的格式输入原始数据，即刻就可获得评价文件中所要求的统计分析及结果。本软件是实验室工作人员必备的工具。 |
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