六、PCR仪
PCR仪,也称DNA热循环仪、基因扩增仪,它是使一对寡核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧,从而酶促合成拷贝数为百万倍的靶序列DNA片段,它的每一循环包括在三种不同温度进行DNA变性、引物复性、DNA聚合酶催化的延伸反应的三个过程。
PCR仪主要应用于基础研究和应用研究等许多领域,如基因分析、序列分析、进化分析、临床诊断、法医学等等。随着分子生物学的不断发展,PCR扩增技术也得到普及推广应用,因此了解PCR仪的性能,熟练掌握仪器的正确使用方法及使用过程中的注意事项,将是十分必要的。
现介绍PCR 扩增仪(Tl Thermocycler)的使用方法和注意事项。
1. 使用方法
(1)接通电源开关,仪器进入准备状态;在显示屏上记录了当前仪器的温度和盖子(Lid)的温度。若仪器正在运行时,须按“ B ”键(start/stop),才能退出运行并返回准备状态。
(2)编写程序段。在准备状态下按“ C ”键(programs)进入编程状态,选定一程序号,然后按“enter”键,进入下一程序;按 “A”(list)键后,选一文件号(empty program);再按“enter”键,进入下一程序;按“ABC”键,进入下一程序,用上下左右键号选择一个字母(A、B、C、D、…),然后按“enter”键,进入下一程序;按“name ok”键,完成文件命名。
(3)设定盖子的温度。“lid temp: ℃”,盖子的温度一般比变性温度要高10℃,例如变性温度是95℃,那么盖子的温度就要设定为105℃。待盖子预热后按“enter”键,进入下一程序。
(4)设定变性温度、变性时间、延伸温度、延伸时间、退火温度、退火时间及循环总数等参数。从第一步依次按“enter”键进入,用四个移位键移动设定位置。先设定温度,后设定时间,全部参数设置完后,按“pgm ok”键,所设定的程序自动被保存。
(5)运行程序。检查设定是否正确, 按“start”键,选择设定好的程序,开始运行。显示屏上可观察到系统运行的情况,按“Stop”可停止运行。
七、凝胶成像系统
本系统属全自动电脑控制影像分析系统,主要拍摄核酸的agarose电泳胶片,及蛋白质的acrylamide电泳胶片。在与markers比较后,可精确计算样本的分子量,对核酸电泳也可准确定量,是分子生物学及生化蛋白试验的重要检测工具。本系统包括暗箱,紫外透射仪,摄像头,变焦镜,电脑以及专业凝胶图象采集及分析.软件(3.3版)。该软件提供对电泳凝胶、斑点测量、PCR密度的定量分析等。此外,还提供图像采集、标注、打印、数据和图像发送到Word、Excel、图像处理等功能。
1.使用方法
(1) 打开电脑,启动凝胶分析软件,进入用户界面。
(2)打开采集凝胶图像的暗箱装置电源开关,放入凝胶,打开紫外光源或白光光源,将采集装置与电脑上采集卡相连,然后选择“文件”菜单中的“图像采集”或工具栏的“图像采集”按钮,出现图像窗口:“开始采集”、“停止采集”、“采集图像”等。如果图像不清晰,可以调节暗箱上的变焦镜,使之清晰。可直接将图像保存起来,也可通过“图像处理”对图像进行旋转、裁剪、滤波、调节对比度……方面的处理。
(3)对读入的电泳凝胶图像,可以启动电泳凝胶分析系统。在“功能选择”菜单中选择“电泳凝胶”或在工具栏上的“电泳凝胶”工具,将出现泳道分析工具栏,并在“图像显示”子窗口中出现一个红色的矩形框。还可进入“条带分析”系统,对条带 进行编号,对二条以上的条带进行比较。
(4)采集图像结束后,关闭暗箱电源开关,从暗箱中取出凝胶,并将玻璃板清洗干净,晾干。
八、空气恒温摇床
摇床(振荡器)为实验室的常规设备。SHK-99-Ⅱ型台式空气恒温摇床,采用微电脑控制系统,温度范围:室温+5℃~60℃,精度±0.5℃;时间范围:1分钟~99小时59分钟;转速范围:60RPM~250RPM。
1.使用方法
(1)LED屏幕上各段数据:
RPM Temp Time
1 000 00.0 00:00
屏幕上“1”表示第一段,如果是第二段则为“2”,“Temp”表示温度,“RPM”表示每分钟转速,“Time”表示时间,不设定时可自动累计时间一直运行。“Temp”、“RPM”、“Time”的值随时可以修改,随时按新值运行。
(2)工作程序设置。按“F1”键,进入设置状态。可在速度,温度,时间,运行等四部分之间切换。在每一部分按“F2”键输入数据,输入完十位数据,再输入个位数据,按“F2”键,再按“F2”键,到小数位,再按“F2”键,又到十位,以此循环。
(3)再按“F1”键,转回运行状态,按“Start”键,电机开始运行,时间开始计时。
(4)按“End”键,结束系统运行。
2. 注意事项
(1)打开电源,系统开始自检,等待LCD屏幕出现“WELCOME”字样,系统自检完毕,可以进行第2步参数设置。若屏幕出现:a.“TEMP ERROR”,表示温度检测线路有错误;b.“MOTOR ERROR”,表示电机部分有错误。
(2)运行过程可以打开箱盖,这样电机不运行,时间也停止,盖上盖接着运行。
(3)工作完毕,关闭电源。关机后,要等一段时间再开机。
九、水的净化装置
分子生物学实验对水的纯度要求越来越高,一般蒸馏水常常难以满足实验要求,大多要求要进行第二次蒸馏(双蒸水),它可以去除水中的大部分有机杂质,但制作时间较长,而且无机杂质还是很多。许多实验还需要去离子水,这就需要阴阳离子交换树脂进行处理。目前,分子生物学实验室都使用高质量的超纯水。如美国微孔滤膜公司的Milli-Q超纯水制造系统所制造的超纯水适用于许多学科领域,如分子克隆、各种色谱分析、氨基酸分析、DNA测序、酶反应、组织和细胞培养等实验。下面介绍RO-MB壁挂式反渗透高纯水机性能及使用方法。RO-MB反渗透高纯水机(杭州永洁达)产水量(25℃)10L/H;产水水质:RO纯水:<10μs/cm,高纯水:>15MΩ.cm;可用自来水制成普通实验用水和高纯水,同时满足不同水质要求。在线电导率仪对产水水质连续检测,可保证产水质量。



