实验室常用技术参数资料（二）
二、常用缓冲液
1．分子克隆常用缓冲液
2．磷酸缓冲液
（1）
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pH |
1mol/L K2HPO4(ml) |
1mol/L KH2PO4(ml) |
|
5.8 |
8.5 |
91.5 |
|
6.0 |
13.2 |
86.8 |
|
6.2 |
19.2 |
80.8 |
|
6.4 |
27.8 |
72.2 |
|
6.6 |
38.1 |
61.9 |
|
6.8 |
49.7 |
50.3 |
|
7.0 |
61.5 |
38.5 |
|
7.2 |
71.7 |
28.3 |
|
7.4 |
80.2 |
19.8 |
|
7.6 |
86.6 |
13.4 |
|
7.8 |
90.8 |
9.2 |
|
8.0 |
94.0 |
6.2 |
（2）
|
pH |
1mol/L Na2HPO4(ml) |
1mol/L NaH2PO4(ml) |
|
5.8 |
7.9 |
92.1 |
|
6.0 |
12.0 |
88.0 |
|
6.2 |
17.8 |
82.2 |
|
6.4 |
25.5 |
74.5 |
|
6.6 |
35.2 |
64.8 |
|
6.8 |
46.3 |
53.7 |
|
7.0 |
57.7 |
42.3 |
|
7.2 |
68.4 |
31.6 |
|
7.4 |
77.4 |
22.6 |
|
7.6 |
84.5 |
15.5 |
|
7.8 |
89.6 |
10.4 |
|
8.0 |
93.2 |
6.8 |
※:用蒸馏水将混合的两种1mol/L贮存液稀释至1000ml，根据Henderson-Hasselbalch方程计算其pH值：
pH=pK’+
在此，pK’=6.86(
3．电泳缓冲液
测序凝胶加样缓冲液
98%去离子甲酰胺
10mol/L EDTA(pH8.0)
0.025%二甲苯青FF
0.025%溴酚蓝
甲酰胺：许多批号的试剂级甲酰胺，其纯度符合使用要求，无须再进行处理。不过，一旦略呈黄色，则应用在磁力搅拌器上将甲酰胺与Dowex XG8混合床树脂共同搅拌1小时进行去离子处理，并用Whatman 1号滤纸过滤2次，去离子甲酰胺分装成小份，充氮存于
常用的电泳缓冲液
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缓冲液 |
使用液 |
浓贮存液（每升） |
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Tris-乙酸（TAE） |
1×：0.04mol/L Tris-乙酸 |
50×： |
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0.001mol/L EDTA |
57.1ml冰乙酸 |
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100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) |
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Tris-磷酸（TPE） |
1×:0.09mol/L Tris-磷酸 |
10×: |
|
|
0.002mol/L EDTA |
15.5ml85%磷酸（ |
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40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) |
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Tris-硼酸（TBE）a |
0.5×0.045mol/L Tris-硼酸 |
5×： |
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0.001mol/L EDTA |
27.5硼酸 |
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20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) |
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碱性缓冲液b |
1×:50mmol/L NaOH |
1×:5ml 10mol/L NaOH |
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1mmol/L EDTA |
2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0) |
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Tris-甘氨酸c |
1×:25mmol/L Tris |
5×: |
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250mmol/L 甘氨酸 |
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0.1% SDS |
50ml 10% SDS(电泳级) |
说明：
①TBE溶液长时间存放后会形成沉淀物，为避免这一问题，可在室温下用玻璃瓶保存5×溶液，出现沉淀后则予以废弃。
以片都以1×TBE作为使用液（即1：5稀释浓贮液）进行琼脂糖凝胶电泳。但0.5×的使用液已具备足够的缓冲容量。目前几乎所有的琼脂糖胶电泳都以1：10稀释的贮存液作为使用液。
进行聚丙烯酰胺凝胶垂直槽的缓冲液槽较小，故通过缓冲液的电流量通常较大，需要使用1×TBE以提供足够的缓冲容量。
②碱性电泳缓冲液应现用现配。
③Tris-甘氨酸缓冲液用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。
2×SDS凝胶加样缓冲液：
100mmol/L Tris·HCl(6.8)
200mmol/L二硫苏糖醇（DTT）
4%SDS（电泳级）
0.2%溴酚蓝
20%甘油
不含DTT的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，应在临用前取1mol/L贮存液现加于上述缓冲液中。
4．凝胶加样缓冲液
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缓冲液类型 |
6×缓冲液 |
贮存温度 |
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0.25%溴酚蓝 |
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0.25%二甲苯青FF |
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40%（W/V）蔗糖水溶液 |
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0.25溴酚蓝 |
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0.25%二甲苯青FF |
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15%聚蔗糖(Ficoll400) |
||
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0.25%溴酚蓝 |
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|
0.25%二甲苯青FF |
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30%甘油水溶液 |
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|
0.25%溴酚蓝 |
|
|
40%(W/V)蔗糖水溶液 |
||
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碱性加样缓冲液: |
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300mmol/L NaOH |
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6mmol/L EDTA |
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18%聚蔗糖(Ficoll400) |
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0.15%溴甲酚绿 |
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0.25%二甲苯青FF |
使用以上凝胶加样缓冲液的目的有三：增大样品密度；以确保DNA均匀进入样品孔内；使样品呈现颜色，从而使加样操作更为便利，含有在电块中能以可预知速率向阳极泳动的染料。溴酚蓝在琼脂糖中移动的速率约为二甲苯青FF的2.2倍，而与琼脂糖浓度无关。以0.5×TBF作电泳液时，溴酚蓝在琼脂糖中的泳动速率约与长300bp的双链线状DNA相同，而二甲苯青FF的泳动则与长4kb的双链线状DNA相同。在琼脂糖浓度为0.5%～1.4%的范围内，这些对应关系受凝胶浓度变化的影响并不显著。
选用哪一种加样染料纯属个人喜恶。但是，对于碱性凝胶应当使用溴甲酚绿作为示踪染料，因为在碱性pH条件下其显色较溴酚更蓝为鲜明。
5．各种pH值的Tris缓冲液的配制
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各种pH值的Tris缓冲液的配制 |
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所需pH值（ |
0.1mol/L HCl的体积 |
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7．1 |
45．7 |
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7．2 |
44．7 |
|
7．3 |
43．4 |
|
7．4 |
42．0 |
|
7．5 |
40．3 |
|
7．6 |
38．5 |
|
7．7 |
36．6 |
|
7．8 |
34．5 |
|
7．9 |
32．0 |
|
8．0 |
29．2 |
|
8.1 |
26.2 |
|
8.2 |
22.9 |
|
8.3 |
19.9 |
|
8.4 |
17.2 |
|
8.5 |
14.7 |