一、酶活性单位问题
惯用单位：以ALT为例：有卡门分光光度（Karmen）单位、穆氏单位、金氏单位、赖氏单位（Reitman）。82年我国推荐后者。
卡门单位：它以血清1ml在25°C 340nm波长下，以光径为1cm，容量为3ml的比色杯，每分钟使A值降低0.001者（使4.83×10-4µmol的NADH氧化）为1单位。
赖氏法单位：它也利用2，4二硝基苯肼比色法（37 °C ），以丙酮酸做标准，他把标准曲线的单位数是用实验方法和卡门分光光度法作配对对比测定求出来的，当时只做到97单位。后来经我国检验工作者补充才延伸到150单位。赖氏单位相当于卡门分光光度法单位。
国际单位：1963年国际酶学委员会推荐，即在25°C及其他最适条件下，每分钟能催化一微摩尔底物转变的酶量。1976年又改为：在特定条件下（30 °C ），一分钟内使底物转变为一微摩尔的酶量为一个国际单位，以IU表示。1IU=1µmol× min-1。由于国内测定温度为37 °C ，所以大多数单位将IU简化为U。
Katal单位：1979年IFCC为了使酶活性单位与国际单位制（SI）接轨，推荐用Katal单位（也称催量，简写为Kat）。即在规定条件下，每秒钟催化转化一摩尔底物的酶量。1 1Kat=1mol×s-1。我国SI制也用Kat单位。但对血清酶量而言显然过大，1Kat=60×106U，所以常用为nKat，
1U=1µmol× min-1=16.67nmol×s-1=16.67nKat
二、K值的设置问题
ΔA 1 1 S+R
酶的活性U/L= —— ×—— ×—— × —— ×106 = (ΔA/min) × K
min ε L S
ΔA =吸光值变化，S=标本量，R=试剂量，
ε =摩尔消光系数，106=将mol换算为μmol
1、理论性K值
试剂盒说明书的KT值为理论K值
酶活性U/L=ΔA/min × KT
KT=1/ε × 1/103 × （S+R）/S × 106
NADH均引用6.22 × 103 ，也有用6.3。
例如：四川迈克ALT说明书只告诉KT= -4180（1/6.22×1.04/0.04×103），中生公司ALT说明书只告诉KT= -1768（1/6.22 × 1.1/0.1 × 103 ）
2、实测K值
由于每台仪器光波、杯子差异均可影响NADH的ε，为此必需实测。方法可用测葡萄糖HK法。
HK
葡萄糖+ATP —— 葡萄糖-6-磷酸+ADP
G-6-PDH
葡萄糖-6-磷酸+NAD+ —— 6-磷酸葡萄糖酸+NADH+H+
表1 各作者实测NADH的ε（×103）
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作者 仪器 NADH的ε
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桑克彦（2000） 东芝200FR 5.87×103
李 勇（2003） 日立7170 5.73×103
蒋声高（2000） 贝克曼仪CX7 5.78×103
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以上实测ε均比理论6.22低，K值应高些
表2 日立7170A全自动生化分析仪上用不同方法得到几种酶的K值
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指示物 波长 理论K值 实测K值 校准K值
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ALT NADH 340nm 2444 2642（8.1%） 3026（23.8%）
AST NADH 340mm 2444 2642（8.1%） 2775（13.5%）
CK NADPH 340mm 3588 3878（8.1%） 3886（8.3%）
GGT 4NA 405mm 1418 1539（8.5%） 1612（13.7%）
GGT 4NB 405mm 1475 1739（17.9%） ——
ALP 4NA（pH10）405mm 757 825（8.9%） ——
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三、温度存在的问题
70年代规定测定温度为30°C，理由是：温度低酶不易变性；30°C容易标化，因为金属镓的融点为29.9 °C。而不少识为人体体温，仪器设置也容易，所以坚持测定时应为37 °C，但这与IFCC规定相违背的，所以改用U/L。另外，NADH的ε在30°C和在37°C时是有差异的。
四、不同国家ALT测定方法比较评
表3 不同国家ALT测定方法比较
GSCC SSCC IFCC 中生 科华
温度 （°C） 25 37 30 37 37
p H 7.4 7.4 7.5 7.3 不详
缓冲液种类 磷酸 Tris Tris Tris 不详
L-丙氨酸mmol/L 800 400 500 500 510
α –酮戊二酸mmol/L 18 12 15 15 18
NADH mmol/L 0.18 0.15 0.18 0.18 0.18
*磷酸吡哆醛mmol/L --- --- 0.1 --- ---
乙二胺四乙酸mmol/L --- 5 --- --- ---
LD U/L 1200 2000 1200 1200 1250
五、酶标准品问题
长期未得到解决，现在欧共体、美国、日本相继推出酶的标准品CRM（有证参考品）、SRM（标准参考品）和ERM（日本酶参考品）。北京临检中心己用日本旭光株式会社酶参考品对50个三级医院进行室间质评，详见下表。
表4 北京用酶标准品测定与标示值的比较
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酶名称 实验室数 标示值 均值 CV 相对偏倚
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ALT 50 95 101 7.8 6.3%
AST 50 123 130 8.7 5.5%
ALP 50 398 252 19.1 -36.6%
AMY 50 329 274 29.2 -16.8%
CK 50 336 316 7.0 -5.9%
GGT 50 186 159 10.2 -14.5%
LD 50 382 363 10.8 -5.0%
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六、测定方法问题
测定方法不但涉及温度，这还关系到试剂配方问题，包括缓冲液的类型和离子强度的不同。1999年IFCC召开大会决定重新制定37°测定酶活性的参考方法。2002年正式颁布了6个文件
1.测定酶催化活性浓度参考方法的概念
2.CK活性浓度参考方法［ATP：肌酸 N-磷酸转移酶（CK）EC2.7.3.2］
3.LD活性浓度参考方法［L-乳酸：NDA+氧化还原酶（LD）EC1.1.1.27］
4.ALT活性浓度参考方法［L-丙氨酸：α-酮戍二酸（ALT）EC2.6.1.2］
5.AST活性浓度参考方法［L-门冬氨酸： α-酮戍二酸（ALT） EC26.1.1］
6.GGT活性浓度参考方法［（γ-谷氨酸）多肽：氨基酸（GGT）EC2.3.2.2］
日本医师会自1997年用JCERM（旭化成株式会社）标准品，选用JCCLS推荐方法，己取得明显成绩。
表五 2003年2812个单位参加37届室间质评(CV%)与1980年比较
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AST ALT LD ALP CK GGT AMY chE
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1980 17.8 24.7 19.8 15 52.6 26.8 36.8 46
2003 4.1 3.2 2.1 2.7 2.9 2.3 4.9 7.9
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ALT连续监测法(即速率法)的分析性能要求
1．总不精密度：天间重复CV≤10％（均值在50～100 U/L）。
2．病人结果可报告范围：可报告上限≥ 400 U/L。在上限处的实测值和预期值的误差≤10％。
3．不准确度：同类型（单试剂或双试剂、有无磷酸吡哆醛等）速率法的方法学比较，在100 U/L处的系统误差或偏倚≤10％。
4．总误差：在100U/L处的总误差≤20％。
使用全自动或半自动分析仪进行速率法测定ALT活力时，应注意：
1、试剂空白值的测定。以蒸馏水替代样品，在波长340nm、比色杯光径为10mm时的吸光度读数，不能小于1.0。特别在试剂盒稳定期末，一定要注意作吸光度的测定。这是试剂内含有NADH量的浓度示量。
2、试剂空白活力的测定。以蒸馏水替代样品，按测定程序检测ALT活力。要求空白检测的ALT“活力”小于5 U/L。这是试剂中的杂酶及NADH的自发氧化所致。过高的空白活力使ALT活力假性升高，必须注意。
3、使用双试剂的实验室要注意：辨别真假双试剂是关键。正规的双试剂是将单独a-酮戊二酸为试剂2。假双试剂盒是试剂2内含有NADH，而配套的试剂1内没有NADH，它起不了去除游离酮酸的影响。这种试剂的测定结果至多和单试剂相似。
七、解决酶测定的方案
1、按照IFCC 2002年公布的5个酶测定方法去做，包括统一试剂盒的配方；
2、购买国际公认的酶标准品来校准；
3、建立国内的酶学参考实验室，并与国际参考实验室网络接轨。
重庆医科大学医学检验系
陈 宏 础
