4.1.2 免疫学方法 直接荧光抗体试验（DFA）是利用荧光标记的单克隆抗体检测标本中有无Ct抗原，采用与15种Ct血清型反应的外膜蛋白特异性单克隆抗体标记荧光和Ct抗原反应后荧光显微镜观察。该方法的特点是：①敏感性较高，Thomas等[7]用不同方法测定宫颈拭子标本中的Ct，酶联免疫法（EIA）可检出稀释至10－5～10－6，而DFA对稀释至10－8后仍可阳性；②适用于各种类型的标本，可作为其他方法的确证试验；③需要操作娴熟且不能用于大量标本的检测；④非典型Ct的判断存在检验者的主观因素，且对女性患者阳性率较低，可能是由于宫颈拭子混有粘液、细菌和鳞状上皮细胞，柱状上皮细胞较少，涂片中病原体较少的缘故。它最适宜用来检测Ct感染高发人群（如性病门诊患者）。EIA是应用酶标抗体检测标本中有无Ct抗原，该方法特异性较高，而且操作简便，易于在临床实验室开展，但敏感性稍差。

　　全自动快速免疫诊断法（Vidas CHL）是一种检测Ct抗原的自动酶联免疫荧光试验，它以酶联免疫荧光技术为检测原理，将EIA与荧光检测技术结合起来，因而具有高度敏感性。Vidas CHL反应在固相容器中自动进行，排除了污染可能。另外，阳性或可疑阳性的CHL标本可用阻抑试验证实，因此该法特异性也较高，用来检测大量标本时非常方便[8]。

　　为满足临床快速诊断Ct的需求，近年来又发展了胶体金免疫扩散试验。在塑板的“样本窗”加样，通过毛细作用渗入“结果窗”，如为阳性则见细线形成。此法的优点是简易、方便、快速，尤其适用于基层单位，缺点是标本中需要足够数量的Ct抗原。主要推荐用于诊断女性生殖道Ct感染。

　　上述方法都是通过测定Ct病原体的抗原来检查Ct的感染，而近年来研究表明[9]，由Ct感染导致的盆腔炎、异位妊娠及输卵管性不育症患者血清中，热休克蛋白60（HSP60）抗体阳性率非常高。由于Ct的抗原与人HSP60有50％的同源性，HSP60可作为重要的免疫靶，介导慢性炎症性免疫病理过程。因此，检测HSP60抗体可以作为Ct感染的慢性发展指标。

　　4.1.3 分子生物学方法 在敏感性、特异性以及对标本的要求等方面，分子生物学方法均优于其他检测方法，目前认为，核酸扩增技术（NAAT）是检测Ct感染最理想的检测方法[2]。

　　基因探针（GP）检测法是用标记的单链DNA探针与Ct的DNA或RNA杂交，通过检测标记物获得结果。目前多采用地高辛、生物素等非放射性标记。研究表明，作为一种临床检验方法，GP检测法仍无法与PCR的速度相比，但比PCR方法直观、可信度高、假阳性率低，且可将多份标本点在同一张硝酸纤维素膜上同时进行探针杂交，进行临床标本的批量检测，有利于质控[10]。近年来采用的增强化学发光探针实验（PACE）提高了检测的敏感性。

　　PCR方法检测Ct具有快速、简便、高度敏感和特异等优点。PCR扩增Ct的靶序列有3种：主要外膜蛋白（MOMP）基因、隐蔽性质粒基因及rRNA基因。近年来，应用PCR技术检测Ct在许多方面取得了长足的进步：①标本抑制的消除Mahony 等[11]发现，女性标本中的β2hCG、晶体、血红蛋白以及细菌的存在会抑制PCR反应，而男性长时间不排尿后的首次尿（FCU）标本的PCR抑制率为0，所以FCU可作为无症状男性Ct感染最合适的标本。许多方法可以解除PCR抑制，包括标本稀释、提纯、冻融、保存过夜、加入特殊物质以及引入内参照（IC）等。PCR检测前1d处理标本，而后在4℃保存过夜，可以使PCR抑制率低于3％。Airell等[12]发现用宫颈拭子取样后以尿液作运送液用于PCR检测，敏感性及特异性均优于单独尿液作PCR检测。②混合标本（Pooling） PCR 最近，欧美等国相继实施了全国性Ct感染的筛查计划，在感染流行率较低的无症状携带者中筛查Ct感染时，每份标本单独行PCR因检出率较低而浪费资源，混合标本PCR恰好解决了这一问题。其原理是将处理后的标本数份混合，作为一检测单位，进行PCR检测。若反应阳性，再分别检测该单位中每份标本。Morre等[13]研究显示，新鲜尿标本分别以5份和10份混合为1个单位，在Ct流行率为4％的人群中作PCR筛查时，与每份标本单独作PCR比较，5份混合的敏感性和特异性均为100％，节约费用率为61.9％；10份混合的敏感性和特异性分别为96.1％和100％，节约费用率为90％。它的不足之处在于，原弱阳性标本因为稀释可能呈现假阴性，使检测的敏感性有所降低。