冯霞

［摘要］  目的  回顾性研究在肝功能异常患者中肝肾微粒体抗体和可溶性肝抗原/肝胰抗体检测的意义和免疫特征。方法  收集肝功能异常患者丙氨酸氨基转移酶(ALT)＞40 u/L的患者血浆5500例，分别检测肝肾微粒体抗体、可溶性肝抗原/肝胰抗体和相关自身抗体，查阅临床资料。结果  5500例血浆中检测出SLA/LP阳性8例，占1.45‰，LKM阳性者4例，占0.73‰。12例阳性病例中，有乙型和丙型病毒性肝炎现症感染证据的分别有1例和2例。大多数患者同时还伴有ANA、AMA、SMA和(或)LSP等抗体阳性。结论  抗LKM-1和抗SLA/LP在我国肝病患者中出现的比例较低，抗LKM-1和抗SLA/LP是自身免疫性肝病的特征性抗体，检测此抗体对自身免疫性肝炎诊断具有重要的意义。
   
    ［关键词］  LKM-1;SLA/LP;肝炎;自身免疫性
   
Study on LKM-1 and SLA/LP in Chinese patients with liver diseases 
   
FENG Xia，YAN Hui-ping，LIU Yan-min，et al.Beijing Youan Hospital，Capital University of Medical Sciences，Beijing 100069，China
   
［Abstract］  Objective  To study the positive rates of LKM-1and SLA/LP in Chinese patients with liver diseases and analyse its characteristics.Methods  5500 sera of liver diseases with ALT ＞40 u/L were collected in 5 years.LKM-1，SLA/LP and related autoantibodies were tested by immumofluorescence assay and euroassay.Results  Of 5500 sera only 4 cases(0.73‰)were positive for both LKM and LKM-1 antibodies.8 cases were positive for SLA/LP(1.45 ‰).Of 12 patients above，1 case had liver cirrhosis with HBsAg-positive，but HBVDNA negative;2 cases had anti-HCV positive，but HCV RNA negative.The most cases were ANA，AMA，SMA and(or)LSP positive respectively.Conclusion  The prevalence of LKM-1and SLA/LP were very low in Chinese patients with liver diseases.LKM-1and SLA/LP were specific to AIH and it would be important to diagnosis of AIH.
   
［Key words］  LKM-1;SLA/LP;hepatitis;autoimmune
   
    抗肝肾微粒体抗体(liver kidney microsomal antibodies，LKM-1)和抗可溶性肝抗原/肝胰抗原(anti-soluble liver antigen/liver-pancreas，SLA/LP)抗体被认为是自身免疫性肝炎的标志性抗体［1］。但国外也有报道［2］，这两种抗体不仅见于自身免疫性疾病，也出现于10%～15%的病毒性肝炎或其他免疫介导的疾病中，这给临床诊断带来了很多困难。为探讨这两种抗体在我国肝病患者中的存在状况和意义，本研究对收集到的肝功能异常患者包括病毒性肝炎、酒精性肝病、自身免疫性肝病、不明原因的肝功能异常等血清5500例进行抗LKM和SLA/LP及相关抗体检测，现将结果报告如下。
   
    1  资料与方法
   
    1.1  一般资料  1999年9月～2004年6月，收集北京佑安医院住院及门诊就诊的患者中丙氨酸氨基转移酶(ALT)大于40 u/L的患者血清5500例，统一检测。
   
    1.2  主要检测项目及方法
   
    1.2.1  间接免疫荧光法(IFA，德国EUROIMMUN公司试剂)  对5500例肝功能异常的患者的血浆标本检测了ANA、AMA、SMA、LSP和APCA。本方法采用HEp-2细胞和5种组织(猴肝脏和心肌组织、大鼠肝、肾和胃组织)的冰冻切片作为抗原，以生物薄片技术将带有细胞和组织的6种切片组合成一个反应区。待检血清自1∶100起始稀释，与各种组织细胞共同孵育30 min；加入异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗体结合30 min；洗片、封片后荧光显微镜观察结果。组织或细胞内出现特征性的绿色荧光，血清稀释度≥1∶100为阳性［3］。
   
    1.2.2  M2、LKM-1和SLA/LP的检测  将高度纯化的各种抗原平行包被于检测膜条上，固定后将膜条放置于温育槽中加入1.5 ml缓冲液振荡孵育15 min，弃缓冲液加入稀释待检血清1.5 ml，振荡孵育30 min。洗液清洗3次，每次5 min，加入碱性磷酸酶标记第二抗体再振荡孵育30 min。清洗，显色。检测膜条上出现蓝紫色条带为阳性，以试剂公司(EUROIMMUN试剂)提供的阳性条带位置标准图判定结果。
   
    1.2.3  其他检测  甲、乙、丙、丁、戊型肝炎病毒标志物检测由我院临床检验中心及肝病研究所统一完成。肝脏活体组织学由我院病理科采用统一标准阅片。
   
    1.3  诊断标准  AIH的诊断参照国际自身免疫性肝炎工作组制定的诊断标准;病毒性肝炎及肝硬化按2000年病毒性肝炎防治方案诊断。
   
    2  结果
   
    5500例血清中检测出SLA/LP阳性8例，占1.45‰，男女比例2∶6，年龄33～75岁，平均53岁。其中6例无甲、乙、丙、丁、戊型病毒性肝炎现症感染证据，1例伴乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和抗HBe、抗HBc阳性，但检测HBV DNA为阴性。另外1例抗丙型肝炎病毒(HCV)IgG阳性，但HCV-RNA阴性。5500例血清中检测出LKM-1阳性者4例，占0.73‰，男女比例3∶1，年龄11～37岁，平均24.5岁。其中1例抗丙型肝炎病毒(HCV)IgG阳性，诊断为病毒性肝炎丙型，但HCV-RNA阴性。其他自身抗体检测结果：SLA/LP阳性的8例患者中，ANA均为阳性(滴度1∶320)，AMA(滴度≥1∶320)者3例，全部M2阳性(＋＋)。SMA阳性者1例(滴度1∶320)。LSP、APCA和LKM-1未见阳性。LKM阳性的患者中ANA阳性1例(滴度1∶320)，APCA阳性者1例(滴度1∶1000)。LSP、AMA、SMA和AMA以及M2未见阳性。
   
    3  讨论
   
    自身抗体LKM-1是诊断AIH-Ⅱ型特异性较强的指标，SLA/LP是诊断AIH-Ⅲ型特异性较强的指标。欧洲国家报道的阳性率较高，日本报道较低。我国LKM-1和SLA/LP的阳性率还未见有报道。本研究中，在检测的5500例肝功能异常患者中以病毒性肝炎为主，包括肝炎肝硬化患者，LKM阳性者4例，仅占0.73‰。抗SLA/LP抗体阳性患者8例，仅占0.15%，不像其他自身抗体在肝功能异常患者中存在一定的比例。尽管如此，其仍为诊断AIH的重要自身抗体。有研究报道通过对2000例患者调查结果显示，SLA/LP对AIH患者的特异性是100％，敏感性为30％。最初研究者认为SLA的靶抗原是8型和18型角蛋白，另有学者报道SLA是谷胱甘肽—S—转移酶。但是WieS等［4］报道SLA的靶抗原既不是谷胱甘肽—S—转移酶，也不是角蛋白抗体，而是一种未知蛋白，可能是一种酶。LKM-1的靶抗原为细胞色素P450 2D6。有报道认为其与HCV病毒基因序列有部分同源性，因此部分LKM-1抗体阳性者同时存在抗HCV抗体。本研究中，LKM-1阳性的患者中1例有丙型肝炎病毒指标存在，SLA阳性的患者中2例分别有乙型肝炎病毒和甲型肝炎病毒指标存在，但均无现症病毒感染证据，不排除在AIH基础上合并感染肝炎病毒的可能。
   
    抗SLA/LP抗体阳性的患者，同时ANA也均为强阳性，故有部分学者将其归入AIH-I型。部分患者伴SMA、AMA、M2阳性。有报道［5，6］AIH特异性抗体(抗-LKM-1，抗一SLA/LP)与抗AMA抗体同时出现时，几乎都证明存在AIH/原发性胆汁性肝硬化(PBC)重叠综合征。此项研究表明有这种情况的存在。但目前如何依据临床和实验室指标对重叠综合症给予确切诊断和分型还需要进一步研究。

［参考文献］

    1  Kanzler S，Weidemann C，Gerken G，et al.Clinical significance autoantibodies to soluble liver antigen in autoimmune hepatitis.Hepatol，1999，31:635-6402.
    2  McFarlaneI G.Lesson about antibodies in autoimmunehepatitis.Lancet，2000，355:1475-1476.
    3  赵景涛，刘玉兰.21世纪医师丛书·消化内科分册.北京:中国协和医科大学出版社，2000，235-240.
    4  Wies I，Brunner S，Henninger J，et al.Identification of target antigen for SLA/LP autoanlibodies in autoimmune hepatitis.Lancet，2000，355:1510-1515.
    5  Czaja J，Carpenter HA，Santrach PJ.Autoimmune cholangitis within the spectrum of autoimmune liver disease.Hepatology，2000，31(6):1231-1238.
    6  Lohse AW，Meyerzum Buschenfelde KH，Franz B，et al.Characterization of the overlap syndrome of primary biliary cirrhosis(PBC)and autoimmune hepatitis: evidence for it being a hepatitic form of PBC in genetically susceptible individuals.Hepatology，1999，29:1080-1084.