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实验室名称 |
项目 |
编号 |
制定日期 |
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艾滋病筛查实验室 |
ELISA方法 |
004 |
2006年1月1日 |
【目的】
保证检测结果准确可靠.
【该SOP 变动程序】
本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
【标本的采取和保存】
随机静脉血2ml，分离血清备用。也可使用血浆标本进行检测。标本宜新鲜，无污染，避免无溶血，避免反复冻融，不可用NaN3防腐。
【操作程序】
1．实验准备：从冷藏环境中取出试剂盒，在室温下平衡30 分钟，同时将浓缩洗涤液作1:20 稀释。
2．加待测标本：加入待测标本每孔100 ul，并设HIV 阳性对照2 孔，HIV 阴性对照2 孔，空白对照1 孔,置37 ℃30分钟。弃去孔内样本，扣干。
3．洗 板：
1)手工洗板：弃去反应板条孔内液体拍干；用洗涤液注满每孔，静置5—10 秒，弃去孔内洗涤液拍干，如此反复5 次，拍干。
2)洗板机洗板：选择洗涤5 次的程序洗板，最后拍干。
4．加酶结合物：每孔100 ul，空白对照孔不加，充分混匀，置37℃孵育30分钟，同上法洗反应板5次。
5．加显色剂：先加显色剂A，每孔50 ul；再加显色剂B，每孔50 ul；充分混匀，放置37℃避光孵育15 分钟。
6．终止反应：每孔加入终止液50 ul，混匀。
7．测定：用酶标仪读数，可选择唯波长450nm(以空白孔校零)或双波长450／630nm，读取各孔OD 值。
【结果判断】
1、实验设计要求阳性对照平均值大于1.20，阴性对照平均小于0.10，阳性、阴性对照OD值之差大于1.20，否则本次实验无效。
Cutoff 值计算：COV=阴性对照平均OD 值+0.10
标本OD 值>=COV为阳性，标本OD 值<COV为阴性
注：阴性对照OD 值低于0.05 作0.05 计算，高于0.05 按实际OD 值计算。
【注意事项】
1．试剂使用前应摇匀，并弃去1-2 滴后垂直滴加，注意均匀用力。
2．从冷藏环境中取出的试剂盒应置室温平衡30 分钟再进行测试，余者应及时封存，置冰箱内贮藏备用。
3．洗板时所用的吸水纸请勿反复使用。
4．不同批号试剂请勿通用。
5．结果判断须在10 分钟内完成。
6．封片不能重复使用。
7．用本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程操作。
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操作人员 |
部门主管 |
质量负责人 |
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姓名 |
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日期 |
2006年1月1日 |
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