真菌是自然界分布最广泛的一类生物体,估计全世界真菌的种类近百万种。真菌也是最常见、最重要的变应原之一。真菌变态反应可引发变应性鼻炎、支气管哮喘、变应性胃肠炎、接触性皮炎、变应性肺炎等多种变态反应疾病。近年来,随着变态反应学、分子生物学及免疫学飞速发展,研究者对真菌变应原研究取得了很大进展。
真菌变应原致敏蛋白组分的研究
真菌变应原致敏蛋白组分的研究是真菌变态反应研究的基础。自上个世纪七十年代Reed 、 Salvaggio率先开展真菌变应原致敏蛋白组分的研究以来,截至2006年2月20日,世界免疫学会联合会(IUIS)共命名了3个亚门、9个目、12个属、21个种的真菌88个致敏蛋白组分。
部分常见致敏真菌[如互隔交链孢霉(Alternaria alternata)]的致敏蛋白组分及其生物功能被查明,cDNA被克隆。部分真菌[如产黄青霉(P. chrysogenum)]变应原致敏蛋白组分的三维结构被成功构建,抗体的结合位点、T细胞活化位点的氨基酸残基序列及在肽链上的位置已明确。
不同繁殖体致敏性的比较研究
Bauziane等的研究结果显示,枝孢芽枝菌 (C. cladosporioides) 孢子的效价高于菌丝,而且有其特异性致敏蛋白组分。而Fadel等的研究结果却显示,互隔交链孢霉菌丝的效价高于孢子(31 kD主要致敏蛋白组分含量高),但孢子亦有其特异性致敏蛋白组分。上述结果提示,无论用于诊断还是免疫治疗的真菌变应原提取液,不能应用长期保存或多次传代的菌种培养制备,否则培养产物以菌丝为主,孢子量少,严重影响变应原提取液效价。
真菌变应原间的交叉反应性
在临床上真菌过敏患者往往不是仅对一种、而是同时对多种真菌过敏,那么多种致敏真菌之间是共同过敏(Co-sensitization)还是具有交叉反应性?Leino等的研究结果显示,腊叶芽枝菌(C. herbarum)与瓶形酵母(P. ovale)具有共同的致敏蛋白组分——糖蛋白。Shankar等的研究结果证实,腊叶芽枝菌(C. herbarum)、互隔交链孢霉、烟曲霉(A. fumigatus)、新月弯孢霉(C. lunata)、紫附球菌(E. purpurascens)具有共同的致敏蛋白组分——26 kD的谷光甘肽-S-转移酶,上述结果对免疫治疗真菌变应原的选择具有重要的指导意义。
基因重组真菌变应原的临床应用
真菌变应原致敏蛋白组分的影响因素非常复杂,不同的菌株、培养基、接种条件、培养时间(生长阶段)、用于提取的繁殖体、提取方法以及培养过程中的气象条件(温度 、湿度)等都会影响真菌变应原的致敏蛋白组分。Esch的研究结果显示,不同厂家互隔交链孢霉的致敏蛋白组分及变应原效价差异极大,甚至同一厂家不同剂型(水剂、甘油剂)的致敏蛋白组分亦差异很大。故而,到目前为止尚无任何一种标准化的真菌变应原提取液。用天然真菌变应原提取液制备标准化制剂难度极大,几乎不可能完成。
基因重组变应原为真菌变应原的标准化提供了一条新的途径。目前部分常见致敏真菌的致敏蛋白组分的cDNA已被克隆,Juan等已经开始进行基因重组变应原rb Alt a 1(大肠杆菌原核表达产物)、 ryAlt a1(酵母菌真核表达产物)应用于互隔间链孢霉过敏诊断的评估。免疫印记及抑制试验结果显示,r Alt a1与 n Alt a1 IgE 结合能力无差异,rb Alt a1、 ryAlt a1 与Alt a1 SPT 结果相近(rb Alt a1稍差),互隔间链孢霉提取液、 n Alt a1 、rb Alt a1、 ryAlt a1的 sIgE间具有良好的相关性。上述结果提示,基因重组变应原rb Alt a1、 ryAlt a1未来有可能代替天然真菌提取液进行点刺试验用于互隔间链孢霉过敏的诊断。
真菌基因组研究
烟曲菌(Aspergillus fumigatus )Af 293 菌株基因组的研究已完成,结果发表于2005年的Science杂志。烟曲菌Af 293 菌株有8 条染色体、29.4×106 碱基、9926 个基因,某些基因的表达与温度相关,证实了真菌变应原致敏蛋白组分受培养过程中温度条件的影响。
近年来真菌变应原的研究取得了很大进展,但与花粉、螨、宠物变应原的研究进展缓慢,特别是变应原标准化研究,不能满足临床特异性诊断、免疫治疗、流行病学研究的需要,尚待采用基因重组变应原方法进行深入研究,为真菌过敏患者提供更准确的诊断及更有效的免疫治疗手段。
