马凤勇， 贾廷儒， 苗 艳
随着输血技术的发展,全自动样品处理机及检测系统在全国各级血站得到广泛应用，根据血站的工作特点,采用微板法自动加样扫描系统完成ABO正反定型鉴定,比其他方法有着不可比拟的优越性。本室自2001年使用全自动血液检测系统以来一直采用微板法ABO正反定型鉴定，但是在实际工作中经常出现正反定型不符误判现象，现把本月正定误判2例分析报告如下。
1 材料与方法
1.1 仪器
AT-Plus/2全自动样品处理机(HAMILTON公司瑞士);ht3酶标仪；T.S温控孵育振荡仪器(ANTHOS公司奥地利)；Modelt-6平板离心机(BECKMAN公司美国)：Aus.lab血型判读软件(澳斯邦公司)；96孔U型和平底微板(澳斯邦公司)。
1.2 试剂
抗-A、抗-A1、抗-B血清(购长春生物制品研究所)。自配试剂红细胞(A型和B型红细胞分别取自筛选后5人份新鲜EDTA抗凝洗涤混合后4%的红细胞)。
1.3 实验操作方法
利用自动加样仪器加样：(1)正定型：用自动加样仪器先加生理盐水200μl到样品血细胞稀释平底微板上,再吸样品红血球8μl加入到稀释微板上浓度为4%,吸25μl分配到U型微板上设置的孔内,在加入经过适当稀释的抗-A、抗-B血清25μl；(2)反定型：用自动加样仪器将样品血清50μl加入到U型微孔板中,并加入25μl配制的A型和B型4%标准红细胞；(3)振荡孵育温度28℃,400r/min,再置平板离心机上400r/min离心1min；(4)振荡悬浮温度28℃,1000r/min,振荡4min取出静置5～10min；(5)判读,扫描点数15，测定波长620nm(借助Auslab读板软件)。
2 结果
献血者甲：男，25岁,体检初筛O型,微板正定O型,反定B型。手工操作，甲红细胞与抗-A 、抗-B、抗-AB均不凝集，反定血清与A型红细胞凝集，与B、O型红细胞均不凝集，吸收放散试验［1］，抗-A血清效价吸收前无变化，抗-B血清吸收后效价从64降为16，用吸收后的红细胞进行热放散，放散液与B细胞凝集，与A细胞、O细胞不凝集， 证明患者红细胞上有B抗原，血型为B型。
献血者乙:男，19岁,体检血型B,微板正定型B型,反定AB型。手工操作，红细胞与抗A不凝集混合外观,镜下有少数红细胞凝集,与抗B凝集明显,反定型血清与A型、B型血细胞均不凝集，吸收放散试验证明患者有A、B两种抗原，用抗-A1与乙血球试验不凝集，根据A亚型定为A2B［2］。
3 讨论
微板法ABO血型的自动检测,从加样的准确度,数据资料的存储及提取快速、简单、经济，消除许多人为的因素导致血型误定，在血站因样品多，工作量大，比其他方法有着明显的优越性，在各级血站得到广泛应用。但由于血型抗原，抗体的多样性，复杂性，抗原抗体减弱，亚型的存在,给血型正确判定造成很大困难, 而微板法自动加样扫描判定，结果自动传送更应提高警惕。在实际的工作中出现误判、错录也是经常发生,必须最大限度地消除影响因素(试剂、标本、红细胞的新鲜程度、加样程序的控制、板的清洁、标本试剂不被污染和失效［3］)。正反定型最好由不同人操作,工作责任心强，经验丰富,适当长期固定人员,反定型最好用未抗凝血,消除纤维蛋白的影响(不同血样更好)。当判定结果出来以后,打出原始记录与微板结果、血样一一核对。当发现问题时按常规的检测一作到底追查分析原因,正反不合时，首先肯定红细胞血型做红细胞吸收放散试验［4］,以排除抗-A、抗-B不凝集的Am、Ael及Bm等弱亚型，其次是血型物质的测定［5］。
ABO血型正确的判定在临床输血中具有重要的意义，由于客观存在的原因，血清学检测有着不可逾越的种种限制，当出现疑难鉴定时采用新技术新方法确保临床输血就显得很重要了，如ABO血型PCR-SSR基因定型技术应在大医院和有条件的血站开展应用，核酸扩增仪从分子水平上进行血型鉴定,还可用于血液病患者骨髓移植的基因配型等试验,确保临床输血安全。
【参考文献】
1 叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程.南京：东南大学出版社，2001，86.
2 李勇，杨贵贞.人类红细胞血型学实用理论与实验技术.北京：中国科学技术出版社，2000，58.
3 李慧，樊忠杰.微板法血型检测几个影响因素的探讨.中国输血杂志，2001，14(3)：165.
4 孟订宝，兰炯采.徐州汉族人ABO血型及HAB分泌型基因分型研究.中国输血杂志，2001，14（4）：216.
5 陈忠，张莉尼，王雪明.国内ABO血型缺乏14例文献综合分析.中国输血杂志，2001，14（5）：364.
作者单位： 472000 河南三门峡，三门峡市中心血站
