试剂标准操作规程
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项 目
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C-反应蛋白 CRP
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方 法
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免疫比浊法
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编写人
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李伯利
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日期
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2006-04-01
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审核人
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李进
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日期
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2006-05-12
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批准人
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吴穷
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日期
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2006-05-23
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本规程自2006年6月01日起实施，每1年复审一次
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公司档案保管者
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唐婧娟
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公司总经理
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吴穷
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质管部试验室
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李跃进
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目 录
1．检测原理
2．标本采集与处理
2.1 受检者的准备
2.2 静脉采血
2.3 抗凝剂
2.4 标本处理
3．试剂
3.1 试剂
3.2 校准血清
3.3 试剂与校准血清的稳定性
4．仪器
5．操作
6．计算
7．操作性能
7.1 精密度
7.2 准确度
7.3 灵敏度
7.4 可报告范围
7.5 特异性
7.6 干扰
8．参考值
9．临床意义
附录A: 参数
1. 检测原理
570-600nm
样本中CRP + 试剂中的CRP抗体 -----------------大分子免疫复合物
在570-600nm监测生成的复合物的浊度变化，与样本中CRP含量成正比。
2. 标本采集与处理
2.1 受检者的准备：
病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：
除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：
不使用抗凝剂。
2.4 标本处理：
血清在2 - 8°C 下储存不超过一周或在-20°C可保存2个月。
3．试剂
3.1 试剂：
本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司hCRP试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：
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组 成
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初始浓度
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R1: 缓冲液
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氨基乙酸
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170mM
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NaCL
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100mM
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EDTA-Na/二水磷酸二氢钠
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50mM
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牛血清白蛋白
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1%
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R2: 胶乳试剂
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CRP抗体包被的胶乳颗粒
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3.2：校准血清
使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的多项免疫类标准液。其中包含HCRP。
校准频次：
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。
3.3 试剂与校准血清的稳定性：
原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。
试剂储存在18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。试剂R1颜色为无色，试剂R2颜色为乳白色，当试剂变色或出现沉淀，按照试剂失效处理。
多项免疫类标准液储存在2-8℃至标签所示失效日期。第一次开启后，不要冷冻。在2-8℃下将瓶盖拧紧保存，标准品可以储存长达6个星期的时间。
4．仪器
KONELAB 30型号仪器。
性能：波长570nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。
5．操作
样品为血清。本法为免疫比浊法。参数见后附，附录A。
试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。
6．计算
测定标准液系列的吸光度，建立吸光度-浓度对应关系的工作曲线。测定标本的吸光度，并在工作曲线上读取浓度值（mg/dL）。如标本的吸光度值超过线性范围，则需稀释标本后，重新测量。
7．操作性能
7.1 精密度：
批内CV< 1.58%，批间CV< 3.42%。
7.2 准确度：
测量结果在利德曼质控血清靶值±2SD范围内。不同方法学试剂的质控结果之间会存在差异，使用时请确保质控选择与试剂的方法学保持一致。
7.3 灵敏度：
hCRP浓度为：5.80mg/dL时，吸光度A600nm约为1.12-1.25。
7.4 可报告范围：
血清与试剂用量之比为1:50时，测定范围为0.06～16mg/dL。
7.5 特异性：
测量值在给定值的90%-110％范围内。
7.6 干扰：
内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。
8．参考值
成人：0～0.5mg/dL；新生儿，脐血：<0.06 mg/dL；4天～一个月婴儿：<0.16 mg/dL。
9．临床意义
C-反应蛋白（CRP）是在炎症过程中出现在血液中的一种非特异性急相反应蛋白。患有急性炎症的病人CRP浓度的变化比红细胞沉积的速度快。CRP浓度的升高以一种非特异性的方式发生在各种组织病变，如：感染期、风湿性关节炎、心肌梗塞、恶性肿瘤等。
研究表明CRP不仅是炎症的非常好的指示物，当显著增加时，它也是冠状动脉疾病的很好的指示物。CRP的浓度在正常参考范围内时，在明显健康的个体中，可以评估预测将来发生冠状动脉疾病的可能性。
附录A: 参数
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试剂标准操作规程
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项 目
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糖化血红蛋白（HbA1c）
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方 法
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免疫凝集法
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编写人
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日期
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审核人
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日期
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批准人
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日期
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文件分发部门和/或个人
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本规程自2004年8月01日起实施，每1年复审一次
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医务科保管者
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院长办公室保管者
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院档案室保管者
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检验科主任
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临床化学检验室
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目 录
1. 检测原理
2. 标本采集与处理
2.1 受检者的准备
2.2 静脉采血
2.3 抗凝剂
2.4 标本处理
3. 试剂
3.1 试剂
3.2 校准品
3.3 试剂与校准品的稳定性
4. 仪器
5. 操作
6. 计算
7. 操作性能
7.1 精密度
7.2 准确度
7.3 灵敏度
7.4 可报告范围
7.5 特异性
7.6 干扰
8. 参考值
9. 临床意义
附录A: 参数
1. 检测原理
1．总血红蛋白的测定：
非离子变性剂
总血红蛋白 ------------------------- 羟高铁血红素
2． HbA1c的测定
HbA1c的测定建立在免疫抑制比浊法基础上。样本中HbA1c与R1中的抗HbA1c抗体反应生成可溶性的抗原-抗体复合物。加入R2启动反应。R1中过量的抗HbA1c抗体与R2中的多半抗原（polyhaptens）反应生成不可溶的抗原-抗体复合物，吸光度的变化可通过比浊方法检测。
2． 标本采集与处理
2.1 受检者的准备：
病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况。孕妇应在产后或终止哺乳3个月后检验。此外，有无服用影响的药物以及采血的季节都应做相关记录。
2.2 静脉采血：
除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：
全血采用使用EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：
用100倍血液标本的溶血剂处理全血（如：全血样本为5ul，溶血剂500ul）, 轻晃混
合避免起泡，约1-2分钟后标本从红色变成棕绿色后，可以进行样本检测。
3．试剂
3.1 试剂：
本科使用北京利德曼生化技术有限公司HbA1c试剂盒，为液体试剂，各组分如下：
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组 成
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浓度
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溶血剂：
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缓冲液
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0.02mol/L； PH=7.4
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稳定剂
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Hb试剂-总血红蛋白试剂：
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PH=7.4
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磷酸缓冲液
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0.02mol/L
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稳定剂
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HbA1c-糖化血红蛋白 R1:
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HBA1c抗体
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>0.5mg/mL
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MES缓冲液
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0.025mol/L； PH=6.2
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HbA1c R2:
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多半抗原
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>8ug/ml
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缓冲液
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0.025mol/L； PH=6.2
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3.2：校准品
使用北京利德曼生化技术有限公司试剂盒提供的标准品。
定标液，每瓶加入2mL蒸馏水或去离子水。轻轻混匀，防止产生泡沫。复溶后的标准品在2-8℃可保存3天，-20℃可保存2个月。标准品无需使用溶血剂处理。
校准频次：
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。
3.3 试剂与校准品的稳定性：
原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。
试剂储存在18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。总血红蛋白试剂为无色透明液体。糖化血红蛋白试剂R1颜色为无色，试剂R2颜色为无色至浅黄色，当试剂变色，按照试剂失效处理。
原包装校准品在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后2-8℃保存可稳定3天，-20℃保存，可稳定2个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。
4．仪器
YY型号仪器。
5．操作
样品为用溶血剂处理后的肝素/EDTA抗凝全血。本法为终点法。参数见后附，附录A。
6．计算
A测定
C = ———— × C0
A标准
式中：c—— 测定总血红蛋白浓度，g/dL；
A测定—— 标本管吸光度；
A标准—— 标准管吸光度；
CO—— 校准血清总血红蛋白浓度，g/dL；
△A测定
C = ———— × C0
△A标准
式中：c—— 测定糖化血红蛋白浓度，g/dL；
△A测定—— 标本管吸光度；
△A标准—— 标准管吸光度；
CO—— 校准血清糖化血红蛋白浓度，g/dL；
7．操作性能
7.1 精密度：
Hb：批内CV< 1.25%，批间CV< 2.87%。
HbA1c：批内CV< 2.25%，批间CV< 3.87%。
7.2 准确度：
测量结果在利德曼质控血清靶值±2SD范围内。不同方法学试剂的质控结果之间会存在差异，使用时请确保质控选择与试剂的方法学保持一致。
7.3 灵敏度：
糖化血红蛋白浓度为：2.33 g/dL时，显色吸光度为0.155～0.190。
7.4 可报告范围：
总血红蛋白：血清与试剂用量之比为24：270 时，测定上限为30 g/dL。
糖化血红蛋白：血清与试剂用量之比为1：25：10 时，测定上限为2.6g/dL。
7.5 特异性：
测量值在给定值的90%-110％范围内。
7.6 干扰：
内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。
8．参考值
总血红蛋白11~17.4g/dL；糖化血红蛋白3.6-6%。
9．临床意义
9.1 HbA1c在DM诊断上的应用 DM是一组病因和发病机制尚未完全阐明的内分泌代谢疾病，以高血糖为其主要标志。DM患者HbA1c值空腹血糖呈正相关。在Ⅰ型糖尿病患者中，糖化血红蛋白A1c并不是反映平均血糖水平的灵敏指标。
9.2 HbA1c用于估计DM临床治疗效果和监测治疗适应性在临床上，HbA1c可作为DM患者血糖控制的一个指标。HbA1c下降缓慢，由于Hb的半衰期长达60天，所以HbA1c不能反映近期的血糖控制水平，不能提供治疗的近期效果，但HbA1c可作为DM长期控制的良好指标，可反映测定前1-2个月的平均血糖水平。用HbA1c来监测DM病情控制程度，根据监测结果，临床医师可以采用饮食控制或有效药物等方法来制订一个控制患者血糖值在正常范围的治疗方案。尤其对IDDM和妊娠DM的治疗监控有用。
9.3 HbA1c的测定可协助判断预后 DM合并视网膜病的病人，其HbA1c为8%-10%，表示病变中等程度，可用激光进行治疗； 若大于10%则为严重病损，预后差。对妊娠性DM，判断是否致畸、死胎和子痫前期则更有意义，故测定HbA1c是妊娠DM控制的重要参数。
附录A: 参数
