试剂标准操作规程
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项 目
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低密度胆固醇（LDL）
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方 法
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直接测定法
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编写人
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李伯利
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日期
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2006-04-01
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审核人
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李进
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日期
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2006-05-12
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批准人
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吴穷
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日期
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2006-05-23
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本规程自2006年6月01日起实施，每1年复审一次
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公司档案保管者
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唐婧娟
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公司总经理
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吴穷
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质管部试验室
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李跃进
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目 录
1. 检测原理
2. 标本采集与处理
2.1 受检者的准备
2.2 静脉采血
2.3 抗凝剂
2.4 标本处理
3. 试剂
3.1 试剂
3.2 校准血清
3.3 试剂与校准血清的稳定性
4. 仪器
5. 操作
6. 计算
7. 操作性能
7.1 精密度
7.2 准确度
7.3 灵敏度
7.4 可报告范围
7.5 特异性
7.6 干扰
8. 参考值
9. 临床意义
附录A: 参数
1. 检测原理
1. 试剂1使血清中高密度脂蛋白和极低密度脂蛋白经化学反应被消除。
胆固醇酯酶
胆固醇酯 + H2O -------------------- 胆固醇 + 脂肪酸
胆固醇氧化酶
胆固醇 + O2 ------------------------- 胆淄烯酮+ H2O2
过氧化氢酶
H2O2 ------------------ O2 + H2O
2. 试剂2中的变性剂释放出低密度脂蛋白后，LDL进行以下反应。
胆固醇酯 + H2O -------------------- 胆固醇 + 脂肪酸
胆固醇酯酶
胆固醇 + O2 ------------------------- 胆淄烯酮+ H2O2
胆固醇氧化酶
过氧化氢酶
H2O2 +4-氨基安替比林+N,N-二甲基间甲苯胺 ----- H2O2 +4-氨基安替比林+N,N-二甲基间甲苯胺------------- 醌染料 + 4H2O
通过在600nm测定醌染料的吸光度，计算出低密度脂蛋白胆固醇的含量。
2．标本采集与处理
2.1 受检者的准备：
病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或中哺乳后3个月检验才能反应其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药等。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：
除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：
肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：
血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3．试剂
3.1 试剂：
本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司LDL试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：
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组 成
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初 始 浓 度
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R1：缓冲液
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100mmol/L PH 7.0
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4-氨基安替比林
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1mmol/L
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胆固醇酯酶
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800U/L
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胆固醇氧化酶
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507U/L
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过氧化氢酶
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800U/L
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R2：缓冲液
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100mmol/L PH 7.0
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N,N-二甲基间甲苯胺
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1.2％
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过氧化物酶
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4KU/L
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3.2 校准血清：
使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。
校准频次：
空白定标：每日需做试剂空白定标。
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。
3.3 试剂与校准血清的稳定性：
原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。
试剂储存在18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。试剂R1和R2颜色为无色，当试剂变色，按照试剂失效处理。
HDL/LDL标准液在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。
4．仪器
KONELAB 30型号仪器。
性能：波长600nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。
5．操作
样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。本法为终点法。参数见后附，附录A。
试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。
6．计算
△A测定
C = ———— × C0
△A标准
式中：c—— 测定低密度胆固醇浓度，mmol/L；
△A测定—— 标本管吸光度；
△A标准—— 标准管吸光度；
CO—— 校准血清低密度胆固醇浓度，mmol/L；
△A ＝A2－A1
7．操作性能
7.1 精密度：
批内CV< 0.25%，批间CV< 0.87%。
7.2 准确度：
检测结果的相对不准确度≤±10%。
7.3 灵敏度：
低密度胆固醇浓度为：5.0mmol/L时，显色吸光度为0.435～0.531。
7.4 可报告范围：
血清与试剂用量之比为1:90:30时，测定上限为25.8mmol/L。
7.5 特异性：
测量值在给定值的90%-110％范围内。
7.6 干扰：
内源性干扰物为HB1000mg/ml、TG 2000mg/ml、BIL 30mg/ml、Vitc300mg/ml对测试结果无明显影响。
8．参考值
小于3.36mmol/L。
9．临床意义
低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒用于定量测定血清中低密度脂蛋白的含量。
LDL的浓度是诊断冠状动脉硬化的一个重要指标。低密度脂蛋白（LDL）是由极低密度脂蛋白（VLDL）转变而来的。LDL的主要功能是把胆固醇运输到全身各处细胞，但主要是运输到肝脏合成胆酸。每种脂蛋白都携带有一定量的胆固醇，但体内携带胆固醇最多的脂蛋白是LDL。体内三分之二的LDL是通过受体介导途径吸收入肝和肝外组织，经代谢而清除的。而余下的三分之一是通过一条“清扫者”通路而被清除的，在这一非受体通路中，巨噬细胞与LDL结合，吸收LDL中的胆固醇，这样胆固醇就留在细胞内，变成“泡沫”细胞。因此，LDL能够进人动脉壁细胞，并带人胆固醇。故LDL水平过高能致动脉粥样硬化，使个体处于易患冠心病的危险中。
附录A: 参数
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