试剂标准操作规程
|
项 目
|
高密度胆固醇（HDL）
|
|
方 法
|
直接测定法
|
|
编写人
|
李伯利
|
日期
|
2006-04-01
|
|
审核人
|
李进
|
日期
|
2006-05-12
|
|
批准人
|
吴穷
|
日期
|
2006-05-23
|
|
本规程自2006年6月01日起实施，每1年复审一次
|
|
公司档案保管者
|
唐婧娟
|
|
公司总经理
|
吴穷
|
|
质管部试验室
|
李跃进
|
目 录
1. 检测原理
2. 标本采集与处理
2.1 受检者的准备
2.2 静脉采血
2.3 抗凝剂
2.4 标本处理
3. 试剂
3.1 试剂
3.2 校准血清
3.3 试剂与校准血清的稳定性
4. 仪器
5. 操作
6. 计算
7. 操作性能
7.1 精密度
7.2 准确度
7.3 灵敏度
7.4 可报告范围
7.5 特异性
7.6 干扰
8. 参考值
9. 临床意义
附录A: 参数
1. 检测原理
1. 试剂1使血清中低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白经化学反应被消除。
胆固醇酯酶
胆固醇酯 + H2O -------------------- 胆固醇 + 脂肪酸
胆固醇氧化酶
胆固醇 + O2 ------------------------- 胆淄烯酮+ H2O2
过氧化氢酶
H2O2 ------------------ O2+H2O
2. 试剂2中的变性剂释放出高密度脂蛋白后，对HDL进行测量。
胆固醇酯酶
胆固醇酯 + H2O -------------------- 胆固醇 + 脂肪酸
胆固醇氧化酶
胆固醇 + O2 ------------------------- 胆淄烯酮+ H2O2
过氧化物酶
H2O2 + 4-氨基安替比林 + HDAOS -------------------- 醌染料 + 4H2O
在600nm醌染料的吸光度的与胆固醇的含量相关。
2．标本采集与处理
2.1 受检者的准备：
病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或中哺乳后3个月检验才能反应其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药等。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：
除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：
肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：
血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3．试剂
3.1 试剂：
本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司HDL试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：
|
组 成
|
初 始 浓 度
|
|
R1：缓冲液
|
100mmol/L PH 7.0
|
|
4-氨基安替比林
|
1mmol/L
|
|
MgCl2
|
100mM
|
|
R2：缓冲液
|
100mmol/L PH 7.0
|
|
HDAOS
|
1mM
|
|
胆固醇脂酶
|
1KU/L
|
|
胆固醇氧化酶
|
1KU/L
|
|
过氧化物酶
|
4KU/L
|
3.2 校准血清：
使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。
校准频次：
空白定标：每日需做试剂空白定标。
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。
3.3 试剂与校准血清的稳定性：
原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。
试剂储存在18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。试剂R1和R2颜色为无色，当试剂变色，按照试剂失效处理。
HDL/LDL标准液在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。
4．仪器
KONELAB 30型号仪器。
性能：波长600nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。
5．操作
样品为血清。本法为终点法。参数见后附，附录A。
试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。
6．计算
△A测定
C = ———— × C0
△A标准
式中：c—— 测定血清高密度胆固醇浓度，mmol/L；
△A测定—— 标本管吸光度；
△A标准—— 标准管吸光度；
CO—— 校准血清中高密度胆固醇浓度，mmol/L；
△A ＝A2－A1
7．操作性能
7.1 精密度：
批内CV<1.78%，批间CV< 3.89%。
7.2 准确度：
检测结果的相对不准确度≤±10%。
7.3 灵敏度：
高密度胆固醇浓度为：2.0mmol/L时，显色吸光度A600nm约0.219~0.261。
7.4 可报告范围：
血清与试剂用量之比为1:90:30时，测定上限为3.9mmol/L。
7.5 特异性：
测量值在给定值的90%-110％范围内。
7.6 干扰：
内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。
8．参考值
大于1.15mmol/L
9．临床意义
高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒用于定量测定血清中高密度脂蛋白的含量。
HDL的作用是将胆固醇运输到肝脏。HDL的含量是评价冠心病的危险度的一个重要因素。血清中HDL－C水平与冠心病发病率呈负相关，HDL－C或HDL－C/TC比值能更好地预测心脑动脉粥样硬化的危险性。HDL－C降低见于以下疾病：（1）脑血管粥样硬化，冠心病。 （2）急、慢性肝病，心肌梗死、外科手术、损伤等应激反应，糖尿病，甲状腺功能亢进或甲低，慢性贫血。
附录A: 参数
永和阳光 -=> 永和阳光 -=> 阳光技术 -=> 正文
