试剂标准操作规程
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项 目
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肌酸磷酸激酶（CK）
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方 法
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DGKC速率法
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编写人
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李伯利
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日期
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2006-04-01
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审核人
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李进
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日期
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2006-05-12
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批准人
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吴穷
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日期
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2006-05-23
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本规程自2006年6月01日起实施，每1年复审一次
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公司档案保管者
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唐婧娟
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公司总经理
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吴穷
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质管部试验室
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李跃进
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目 录
1. 检测原理
2. 标本采集与处理
2.1 受检者的准备
2.2 静脉采血
2.3 抗凝剂
2.4 标本处理
3. 试剂
3.1 试剂
3.2 校准血清
3.3 试剂、校准血清的稳定性
4. 仪器
5. 操作
6. 计算
7. 操作性能
7.1 精密度
7.2 准确度
7.3 灵敏度
7.4 可报告范围
7.5 特异性
7.6 干扰
8. 参考值
9. 临床意义
附录A: 参数
1. 检测原理
CK
肌酸磷酸 + ADP ----------- 肌酸 + ATP
HK
ATP + 葡萄糖 --------- 葡萄糖-6-磷酸 + ADP
G6PDH
葡萄糖-6-磷酸 + NADP+------------ 6-磷酸葡萄糖酸 + H+ + NADPH
NADPH在340nm处有特异吸收，通过测定NADPH生成速率计算出CK活性。
2．标本采集与处理
2.1 受检者的准备：
病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：
除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：
血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：
血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3．试剂
3.1 试剂：
本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司CK试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：
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组 成
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R1:R2=4:1
混合后溶液的浓度
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咪唑缓冲液:
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100mmol/L PH=6.7
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N-乙酰半胱氨酸（NAC）
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20mmol/L
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EDTA
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2mmol/L
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NADP
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2mmol/L
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葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G-6-PDH）
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>1500U/L
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己糖激酶（HK）
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>2500U/L
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葡萄糖
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20mmol/L
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肌酸磷酸
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30mmol/L
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二腺苷-5-磷酸
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10umol/L
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ADP
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2mmol/L
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3.2：校准血清
使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。
校准频次：
空白定标：每日需做试剂空白定标。
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。
3.3 试剂、校准血清的稳定性：
原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。
18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。当试剂空白吸光度高于0.5时，试剂按照失效处理。
多项校准血清在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。
4．仪器
KONELAB 30型号仪器。
性能：波长340nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。
5．操作
样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。本法为速率法。参数见后附，附录A。
试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。
6．计算
ΔA/min×Vt×1000
CK(U/L) = ----------------------------- = ΔA/min×F
e×Vs×d
式中：ΔA/min—— 每分钟吸光度变化率； e —— 18.5 摩尔吸光系数；Vt—— 反应液总体积
（ml）； d —— 1 比色杯光径（cm）；
1000—— 变化因数； Vs—— 标本体积（ml）；
7．操作性能
7.1 精密度：
批内CV<0.52%，批间CV<3.21%。
7.2 准确度：
检测结果的相对不准确度≤±10%。
7.3 灵敏度：
肌酸磷酸激酶浓度为：500U/L时，吸光度变化率ΔA340nm/min为0.130～0.158。
7.4 可报告范围：
血清与试剂用量之比为1:25时，测定上限为1200U/L。
7.5 特异性：
测量值在给定值的90%-110％范围内。
7.6 干扰：
内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。
8．参考值
0～190U/L。
9．临床意义
肌酸激酶广泛分布于骨胳肌、心肌、脑组织中，肝和红细胞不含此酶。目前在临床上主要用于诊断心肌梗塞。在进行性肌肉营养不良、多发性心肌炎、肌肉损伤、脑膜炎等此酶活性升高。
附录A: 参数
