试剂标准操作规程
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编写人
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李伯利
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日期
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2006-04-01
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审核人
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李进
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日期
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2006-05-12
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批准人
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吴穷
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日期
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2006-05-23
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本规程自2006年6月01日起实施，每1年复审一次
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公司总经理
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吴穷
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公司档案保管者
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唐婧芳
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质管部试验室
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李跃进
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目 录
1. 检测原理
2. 标本采集与处理
2.1 受检者的准备
2.2 静脉采血
2.3 抗凝剂
2.4 标本处理
3. 试剂
3.1 试剂
3.2 校准血清
3.3 试剂与校准血清的稳定性
4. 仪器
5. 操作
6. 计算
7. 操作性能
7.1 精密度
7.2 准确度
7.3 灵敏度
7.4 可报告范围
7.5 特异性
7.6 干扰
8. 参考值
9. 临床意义
附录A: 参数
1. 检测原理
脲酶催化尿素水解产生氨和CO2。在谷氨酸脱氢酶催化下, NH3与α-酮戊二酸和NADH反应生成NAD+。NADH在340nm处有特异吸收,通过测定NADH在340nm 处反应速度与同样处理过的标准比较计算出尿素含量。
脲酶
尿素＋ H2O ----------- NH3 ＋ CO2
GLDH
NH3 ＋α-酮戊二酸＋ NADH ------------- L－谷氨酸＋ NAD+ ＋ H2O
2．标本采集与处理
2.1 受检者的准备：
病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：
除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：
血浆使用EDTANa2（1.8mg/mL）或肝素（0.1mg/ml）作为抗凝剂。
2.4 标本处理：
血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3．试剂
3.1 试剂：
本科使用湖南永和阳光科技责任公司Urea试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：
试剂组成:
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组 成
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R1:R2=5:1（混合后的浓度）
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R1: TRIS缓冲液
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120mmol/L
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ADP
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0.6mmol/L
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谷氨酸脱氢酶 (GLDH)
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≥1000U/L
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α-酮戊二酸
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7.0mmol/L
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R2: 起动液
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NADH
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0.25mmol/L
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脲酶
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≥1000U/L
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尿素标准液 7.14 mmol/L
3.2：校准血清
使用湖南永和阳光科技责任公司提供的40项校准血清。
校准频次：
空白定标：每日需做试剂空白定标。
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的±2SD范围，需要全点定标。
3.3 试剂与校准血清的稳定性：
原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。
18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。当试剂空白吸光度低于1.000时，试剂按照失效处理。
多项校准血清在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。
试剂盒配备的水标准液在2-8℃储存至标签所示失效日期，开瓶后2-8℃储存避免污染，可稳定2个月。
4．仪器
KONELAB 30型号仪器。
性能：波长340nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。
5．操作
样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。本法为终点法。参数见后附，附录A。
6．计算
ΔA测定
C = ———— × C o
ΔA标准
式中：c—— 测定尿素氮浓度，mmol/L；
ΔA测定—— 标本管吸光度；
ΔA标准—— 标准管吸光度；
CO—— 校准血清尿素氮浓度，mmol/L；
ΔA＝A2－A1
7．操作性能
7.1 精密度：
批内CV≤4.5%，批间CV≤5.5%。
7.2 准确度：
检测结果的相对不准确度≤±10%。
7.3 灵敏度：
本试剂最低检测限为0.11mmol/L。
7.4 可报告范围：
血清与试剂用量之比为1:80时，测定上限为35.00mmol/L。
7.5 特异性：
测量值在给定值的90%-110％范围内。
7.6 干扰：
内源性干扰物为Hb1000mg/ml、TG 2000mg/ml、BIL 30mg/ml、VitC 300mg/ml对测试结果无明显影响。
8．参考值
尿素参考值范围：（2.86-8.20）mmol/L。
9．临床意义
尿素测定试剂盒用于定量测定人体血清、尿中的尿素含量。尿素是体内氨基酸分解代谢的最终产物之一。血中尿素来源于肝脏，通过肾脏随尿排出体外。测定血清中尿素的量可推测肾脏的排泄功能。肾脏功能衰竭、肾炎、肾盂肾炎、泌尿道梗阻等可使血液尿素含量升高。
附录A: 参数
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