自身抗体(autoantibodies)是指直接抗细胞内、细胞表面和细胞外成份的抗体。
    （一）细胞内抗原包括核成份和细胞浆成份，常用于免疫风湿病学临床试验诊断的相应抗体有①抗核抗体（antibodies to nuclear antigens, ANAs）；②抗细胞浆抗体（antibodies to complasmic antigen, ANCA；如抗中性粒细胞浆抗体（antibodies to neutrophil complasmic antigen, ANCA和抗血管内皮细胞抗体（antibodies to endocelial cell, AECA等）。③细胞表面抗原有人类白细胞相容性抗原（human leukocyte antigen, HLA）及其亚型等。在病理情况下，有些组织细胞也可在细胞膜裸露出各种不同的抗原，并产生相应的自身抗体。抗细胞外成份抗体主要有抗胶原因子和狼疮抗凝物。
    目前临床应用检测自身抗体的主要免疫学试验技术种类有：间接免疫荧光法（indirect immune fluorescence, IIF）、直接免疫荧光法(IF)、酶联免疫吸附试验（ELISA）、酶免疫细胞化学、乳胶颗粒凝集、免疫扩散、免疫电泳、放射免疫检验和免疫印迹技术等。其中，IIF法和ELISA法被广泛用于临床检测直接抗细胞成份和可溶性细胞成份抗体的检测。有时为了弥补试验技术或试剂中可能存在的缺陷以及试验条件的影响，提高试验结果的特异性和敏感性，也用一种方法检测多种自身抗体，或一种自身抗体用多种试验方法检测。
    １．ANA　ANA，故名思意即抗细胞核成份的抗体，是所有抗核抗体的总称。到目前为止，至少发现有３０种抗核成份的抗体，这些核抗原主要分布在细胞刻内，但也有分布在核周的胞浆内。ANA最早用于诊断系统性红斑狼疮，目前作为系统性红斑狼疮和其他系统性风湿病的筛选试验诊断，具有很高的敏感性，但缺乏特异性（表-1）。　　　
    检测ANA的方法有间接免疫荧光和ELISA两种方法，在实验室操作和临床意义方面两者有差异。
    （１）间接免疫荧光　常用的底物为有核组织细胞，如鼠肝或鼠肾组织细胞；也用肿瘤细胞株，如子宫颈癌细胞（Hela cell）或喉癌细胞（Hep-2 cell）。由于癌细胞的核更大，增殖活跃，细胞的分裂期明显，故更易观察和分析结果。依照细胞核染色的类型分为：斑点型（specle, S型）、匀质型（difusion, D型）、周边型（peripheral, P型）和核仁型（nucleolei, N型）4型。也有人将其中的斑点型又分为粗斑点型）和细斑点型（即着丝点型，antibody to centromere antigen, ACA），共分为5型。各核型的ANA在不同的系统性风湿病中有各自相对的特异性。少数老年人可有低滴度的ANA阳性。

表－1 风湿病中ANA及其临床意义

    应当指出的是：在应用间接免疫荧光法检测抗核抗体时可能出现敏感性过高（即假阳性）或敏感性过低（即假阴性），这在实验过程中是可能遇到的。敏感性过高（即假阳性）的原因主要发生在实验过程中的技术问题，可能对二抗（荧光抗体）的漂洗不彻底所致，严格按程序操作或加用伊文斯兰染色覆盖其非特异荧光即会避免此类问题的发生。发生敏感性过低（即假阴性）的原因较多：①由于经典的间接免疫荧光法检测抗核抗体是用单种细胞针对多种抗体的检测，不同的组织细胞核内所含的针对这些抗体反应的抗原物质的含量或抗原性有差异：如小牛胸腺和兔胸腺细胞核内所含的抗原量明显富于其他组织细胞，组蛋白和硬皮病－70(Scl-70)抗原分别在肾脏和脾脏细胞核中含量高。当一些组织细胞所含的某种核抗原的量较少或抗原的抗原性较弱时，与抗体发生的免疫反应不足以用IIF法检测到，由此造成实验结果假阴性；②不同病人和不同病期或病种的血清中所存在的抗体种类和抗体的量有明显的差异，也同样会影响实验结果。
    （２）ELISA法　此实验方法检测ANA在试验原理上反应敏捷，操作简便。所用试剂是TRINITY公司新近研究推出的一种经过特殊处理的反应底物作为抗原包被的９６孔反应板。此抗原的包被分两步：①先将经过培养并稀释好的Hep-2细胞悬液中的细胞包被到反应板孔内；②再将已经提纯好的，针对通常用于临床检测的多种ANA相应的多组份核抗原包被到同一反应板孔内。如此的包被抗原既克服了单种细胞作为反应底物的缺陷，又同时提高了实验的敏感性。
    （３）依照抗原的生物化学特性将ANA分为4大类：抗DNA类、抗组蛋白(histone, H)类、抗非组蛋白类即抗可提取性核抗原(extractable nuclear antigen, ENA)类和抗核仁类抗体。共有30余种抗体，其中临床常用10余种，构成ANA谱，其在系统性风湿病中的临床意义见表－2。

表－2 ANA谱及其临床意义※

    ※ 表内数字均为百分数
    根据各抗原特性，采用不同的试验方法检测相应的抗体。①抗ds-DNA抗体的检测：经典的试验方法间接免疫荧光法，用马疫锥虫或短膜虫作为反应底物，虽其特异性较高，但敏感性较低；放射免疫法（结合率≥20%为阳性）和金标抗体测定法其实验结果相对较低。②抗组蛋白（H）抗体的测定曾用肾脏组织细胞作为反应底物应用免疫荧光法，有于此抗原的稳定性较差，其实验的敏感性较低，故现采用ELISA较多。③抗非组蛋白（ENA）抗体的测定以往常以粗提的多组份ENA抗原为反应底物，用对流免疫电泳法测定，也称第二筛选实验。然后琼脂免疫双扩散方法，以粗提的单组份抗原为底物分别对相应的抗体测定。近年来，免疫印迹（Western Blotting）技术应用于临床，给临床检测抗体带来了许多方便，但两种方法测定抗体的阳性率基本相同，只是免疫印迹技术更简便、更科学化。由于目前所应用的反应板是硝酸纤维膜，反应底物为提纯的多组份ENA多肽，某些试剂的稳定性尚存在一定问题，故通常琼脂免疫双扩散和免疫印迹两种方法同时做以相互弥补其实验缺陷，提高其敏感性和特异性。④抗核仁抗体的测定通常应用间接免疫荧光法。抗脱氧核糖核蛋白（DNP）抗体，与狼疮细胞有同等的临床意义，通常应用乳胶颗粒凝集法测定，近年来应用ELISA方法测定，具有实验简便、敏捷和敏感性高的优点。
    （二）类风湿因子（rheumatoid arthritis factor，RF） 自Waaler和Rose报告RF以来，对RA的诊断与治疗起到了重要作用。RF是一种直接抗IgG的Fc部分的抗体，故又称自身抗抗体，是免疫复合物的一部分，与RA血管炎的发生有关，是冷球蛋白的主要成份，其中IgM-RF和IgG-RF已用于临床测定。几乎所有正常人均存在RF基因编码，但很少出现RF阳性，仅占总人群的2%～3%，且大多为老年人和有慢性炎症的病人。在老年人中有2%～5%阳性，这种阳性主要为IgM-RF阳性，滴度较低。通常临床所测的RF为IgM-RF。IgM-RF是巨球蛋白，与绵羊红细胞可发生凝集反应，但测定方法不便。目前通常用致敏乳胶颗粒和ELISA法测定IgM-RF，具有同样的价值（见表－3）

表－3 RF的临床意义

    注：RA．类风湿关节炎；SLE．系统性红斑狼疮；AS．强直性脊柱炎；PSS．系统性硬化症；ISS．原发性干燥综合征；MCTD．混合结缔组织病。
    IgM-RF测定滴度为：1∶16可疑，≥1∶32阳性。RA中可有很高的滴度。IgG-RF在血清中出现较晚，但更有意义。特别在RA活动期IgM-RF阴性时，而IgG-RF可阳性，对活动期RA的阳性率可达90%以上。目前常用的测定方法为ELISA，方法敏捷，能够定量检测，更有利于临床诊断和评价病情。对于血清和滑液中RF测定的临床意义无差异性，而血清测定更直接、方便，不必滑液测定。
    （三）红斑狼疮细胞（lupus erythmatosus cell, LEC）　LEC是最早能鉴别SLE作为自身免疫病的抗核试验，但缺乏敏感性和特异性。在RA等患者血清中亦可测得LEC，而在SLE患者血液中可能由于药物等因素的影响其阳性率很低。因此，目前有条件的医院已基本不用此项检查，由抗DNP抗体取代，且具有同等的临床意义，在活动期SLE中阳性率为40％左右。
    （四）抗中性粒细胞浆抗体（ANCA）和抗血管内皮细胞抗体（AECA）　　ANCA在血管炎疾病的诊断中有重要的临床意义，目前检测ANCA多用间接免疫荧光法，也用ELISA法针对靶物质测定。依照荧光法测定显示的核型分为胞浆型、核周型和不典型核周型3型（表－4）。胞浆型ANCA（cANCA）是一种抗蛋白激酶-3(PR3)的抗体；而核周型ANCA（pANCA）是一种抗髓过氧化物酶(MPO)的抗体。pANCA在许多炎症性疾病中，特别是在Goodpasture综合征、结节性多发性动脉炎等血管炎类疾病中呈阳性。cANCA在韦格内肉芽肿疾病中的阳性率为30%～90%，有特异性。用ELISA法可直接测定抗蛋白激酶-3(PR3)的抗体和抗髓过氧化物酶(MPO)的IgG和IgM两种抗体，同时具有更高的敏感性。

表－4 ANCA的临床意义

    AECA目前应用免疫荧光法测定，其表现形式和临床意义与ANCA有近似之处，但对一静脉炎为病理基础的血管炎疾病更有意义。
    （五）近年来相继开展了类风湿关节炎早期诊断的抗体检查，如①抗核周因子(antiperipheral factor, APF)，用间接免疫荧光法，底物为上皮细胞；②抗角蛋白抗体(AKA)，用直接免疫荧光法，底物为小鼠食道；③抗Sa抗体和抗RA33抗体，常用Western Blotting法测定。此4种抗体在类风湿关节炎中的阳性率约为40%～75%，敏感性和特异性均在90%以上。
    （六）人类白细胞相容性抗原（HLA）　Ⅰ类抗原中，90%的强直性脊柱炎患者和50%～70%的瑞特综合征患者HLA-B27阳性，目前采用细胞毒实验和流式细胞仪两种方法测定，其临床意义相同，但两种实验方法的临床实用性有待进一步验证。Ⅱ类抗原中，HLA-DR2在系统性红斑狼疮患者中表达增强，HLA-DR3在系统性斑狼疮和干燥综合征患者中表达增强；HLA-DR4/DW4与类风湿关节炎的发生有明显关系。
    （七）抗磷脂抗体（antibodiese to cardiolipin antigen, ACLA）　ACLA中的抗心磷脂抗体和抗狼疮凝集物对系统性风湿病的病情评价具有重要意义。ACLA可为原发，即抗磷脂抗体综合征；也可继发于各种血管炎疾病。抗心磷脂抗体通常采用ELISA法测定其IgG、IgA、IgM三种抗体，阳性提示有发生习惯性流产、微血栓形成和血小板减少的可能。狼疮抗凝物阳性预示有血栓形成的可能，通常发生在红斑狼疮和以血管炎为病理基础的病人。