吴平芳，刘涛，陈妙玲
摘要:目的 寻找微量、快速、简便、准确检测乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的方法。 方法 用微量手指末梢血稀释液，酶联免疫法（ELISA）测定HBsAg。 结果 460份微量末稍血检出阳性HBsAg39份，阳性检出率为8.48%，与静脉血检测的阳性率为8.26%差异无显著性（P>0.05）。 结论 该法具有快速、简便、准确可靠的优点，完全可以替代静脉抽血进行HBsAg的检测。
关键词:微量;检测;HBsAg
Detection of HBsAg from micro fingertip blood sample by using ELISA.
WU Ping-Fang，LIUTao，CHEN Miao-ling.
（Shenzhen Municipal Center for Disease Control and Prevention，Shenzhen518020，Guangdong，P.R.China）
Abstract:Objective To establish an instant，simply and accurate method to dectect HBsAg in microlitres fingertip blood sam-ples. Methods 40μl of fingertip blood samples were collected and diluted，then HBsAg was detected using ELISA method. Re-sults 460blood samples were detected，and the positive rate was8.48%. Conclusion With the ELISA method using venous blood samples，no significant differece was observed.Conclusion using fingertip blood samples to decect HBsAg is easily and conve-nient，which could be instead of venous blood samples.
Key words:Microlitre;Detection;HBsAg
乙型肝炎表面抗原（HBsAg）是诊断乙型肝炎或乙型肝炎阳性携带者的重要指标之一，也是卫生饮食从业人员必检项目。乙肝表面抗原HBsAg的检测已成为常规检验项目。目前，HBsAg的检测一直采用静脉血，由于静脉采血费时，工作量大，特别是小学生及婴幼儿的采血更加困难。寻找快速、简便、准确的检测方法已成为大家研究探讨的课题，我们用末稍血代替静脉血测定HBsAg，探讨的方法为同一对象采集微量末稍血和静脉血，用酶联免疫法（ELISA）对HBsAg进行检测，作出比较，现将检测方法和结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料 试剂:选用深圳市月亮湾生物公司生产的酶联免疫法（ELISA）乙肝表面抗原HBsAg试剂盒。仪器:美国伯乐公司1575型洗涤器、550型酶标仪。
1.2 方法 标本采集及对象:来源于饮食从业人员，同一对象采集末梢血与静脉血作试验之用。末梢血采集为手指末梢血约40μl，加入0.36ml的无菌生理盐水中，混匀，离心分离或冰箱放置4h以上沉淀释出上清液，此液相当于血清以1:20的比例稀释，吸上清液作测定之用 ［1］ 。测定方法:用酶联免疫法（ELISA）检测末梢血标本和静脉血标本。严格按说明书操作，阳性结果判断均为:P/N值≥2.1为阳性。
2 结果
通过对同一对象采集静脉血和手指末梢血血样标本各460份，用酶联免疫法检测HBsAg，其结果见表1。表1 末梢血与静脉血测定HBsAg阳性结果比较（略）
3 讨论
3.1 末梢血检测HBsAg的结果分析 同一对象末梢血460份标本检出HBsAg阳性39例，检出率8.48%（39/460）;静脉血460份，检出38例，检出率8.26%（38/460）。两者经统计学处理，χ 2 =0，P>0.05，二者差别无显著性。ELISA法特异性强、灵敏度高，是第一代检测方法灵敏度的10～100倍，检测可达到1pg/ml的水平 ［2］ 。我们对静脉血HBsAg阳性血清l38例标本作1:10、1:20、1:30、1:40、1:50、1:60比例稀释测定，每个稀释度检测结果均为阳性。本方法是用末梢血作1:20的稀释，若标本是HBsAg阳性者，ELISA法完全可以检测出来，不会出现HBsAg阳性标本漏检现象。试验证明，微量末梢血经一定的比例稀释后，可以替代静脉血作HBsAg的测定，结果完全可靠、准确。
3.2 影响末梢血测定HBsAg的因素 首先是末稍血稀释液是否混有红细胞和溶血因素，试验中标本无溶血和污染现象，吸上清液未混有红细胞时，几乎对试验无任何影响。结果中，静脉血阳性38份，末稍血阳性39份，其中一份与静脉血不符，为假阳性结果。经分析原因，结果是操作过程中，不小心吸稀释液上清液时吸有红细胞，由于吸样混入了红细胞，则在洗涤时很难彻底洗去，易造假阳性。这可能是红细胞膜上含有的蛋白质可以使红细胞非特异性吸附在聚苯乙烯微孔板上，在操作过程中，红细胞破坏，释放出丰富的过氧化物酶的成份，这些成份粘附于酶标板不易被洗去，产生辣根过氧化物酶样与ELISA法显色剂作用而显示假阳性 ［3］ ，从而影响结果的准确性。有文献报导，溶血标本亦可导致ELISA方法检测HBsAg产生假阳性结果。假阳性结果与溶血程度有关，轻度溶血（30～40g/L）者不影响检测结果;溶血程度达到40g/L以上者，则产生假阳性结果 ［4］ 。因此吸稀释液要小心注意，采血时不能有溶血现象，吸稀释上清液时不能吸到红细胞，否则会出现假阳性结果。其次是洗涤因素，我们在试验中发现，洗涤也是影响测定结果的关键因素。因为ELISA法是一个复杂的反应过程，反应各步中，酶结合物都可能直接吸附在酶标板上，以及一些残留的未形成包被抗体-抗原-酶标抗体复合物等都可与底物反应，因此洗涤必须彻底。洗涤时每孔加入的洗涤液不能过满，以免互溢交叉污染造成假阳性。洗涤次数和时间不能任意缩短，洗涤完后，将板拿出翻过来扣在吸水纸上吸干水分，这样可以避免一些洗涤因素造成的假阳性结果。
3.3 末梢血检测HBsAg的优点 手指末稍采血与静脉采血比较，主要是用血量少，采血简便，操作简单，结果准确快速;与其它测定HBsAg方法比较，如胶体金免疫层析法检测乙型肝炎HBsAg比，其有在技术上灵敏度高 ［5］ ，在经济上成本价格较低等优点，非常适用于卫生防疫部门对饮食从业人员HBsAg的检查测定 ［6］ 和大规模人群的HBsAg携带者的普查及流行病学的调查，特别适用于小学及幼儿园人群HBsAg检测调查。该方法已应用到对公共卫生、饮食从业人员和学校学生等乙型肝炎HBsAg的检测。
参考文献:
［1］饶启琳，欧红丽.末稍血管微量采血检测HBsAg结果分析［J］.广东卫生防疫，1995，21（1）:79.
［2］饶周有乔，潘光言.微量末梢血直接稀释法测定HBsAg初探［J］.中国卫生检验杂志，1996，6（3）:12.
［3］刘金荣.ELISA法检测HBsAg的注意事项［J］.江西医学检验.1994，01:67.
［4］罗红斌，禹鲁民.溶血标本导致HBsAg假阳性结果的进一步探讨［J］.临床检验杂志.1994，12（增刊）:150.
［5］曾章新，刘文星，朱忠勇，等.胶体金免疫层析法检测乙型肝炎表面抗原的评价［J］.中华医学检验杂志，1999，6（22）:320.
［6］吴作成.微量采血检验用于从业人员血检［J］.中国卫生检验杂志，1996，6（4）:153.
作者单位:深圳市疾病预防控制中心，广东深圳 518020.
