酶联免疫吸附试验（ELISA法）检测乙型肝炎病毒是目前最常用的方法之一，但该法影响因素颇多。近年发展起来的荧光定量聚合酶链反应（以下简称PCR法）。不仅可避免常规PCR扩增产物易污染而导致的假阳性、避免ELISA法灵敏度不高等弊病，同时可报告HBV-DNA体内复制的定量结果。本文用PCR法与ELISA法对1600份乙肝血清标志物（HBVm）6种不同阳性模式样本对比检测，以及100份HBVm全阴者两法结果进行对比分析。以探讨荧光定量PCR法的临床应用价值。
1 材料与方法
1.1 样本来源 2003年10月～2004年3月，本院住院及门诊就诊患者检查HBVm及HBV DNA者1600例血清样本，100例HBVm全阴者血清样本。
1.2 主要仪器 Light Cycler全自动荧光定量PCR诊断系统（瑞士罗氏公司生产），酶标仪（芬兰:DENCEY DRAGON We Scan MK2），洗板机（芬兰:absystems Wall Wash Ac）。
1.3 主要试剂 深圳PG公司生产的PCR定量检测试剂盒（有效期内使用），厦门新创“二对半”试剂盒（有效期内使用），质控物（ELISA法质控物含量HBs:1ng/ml，抗HBs:30MIU/ml，HBe:2NCU/ml，HBV DNA:4.0×104cps/ml）。以上质控物均由卫生部临床检验中心供给，有效期内使用。
1.4 方法 严格按PCR及ELISA试剂盒说明书要求操作，同时作阴阳性对照及室内质量控制。
2 结果
2.1 HBVm不同阳性模式与HBVDNA检测结果 HBVm检测阳性结果，分为6种血清学标志模式共1600例与PCR法检测HBV DNA结果比较，结果见表1。
2.2 100例HBVm全阴模式与HBV DNA关系 见表2。
表1 HBVm不同阳性模式与HBV DNA检测结果 （略）
3 讨论
乙型肝炎血清标志物HBsAg（+），HBeAg（+），抗-HBc（+）模式，提示患者体内HBV DNA呈活动性复制，传染性强。本文结果表明该类型实验组PCR法HBV DNA阳性其含量以每毫升的拷贝数定量发出报告，能直接判断体内HBV DNA的复制水平，检出率高达99.2%，高于张春兰等 ［1］ 报道的93.75%。该模式组仅有0.8%患者HBV DNA结果<4×10 3 cps/ml，是否与实验误差有关。第二实验组血清标志物为HBsAg（+），抗-HBe（+），抗-HBc（+）模式HBV DNA检出阳性率为66.7%，明显低于第一组（P<0.01）。一般情况下，抗-HBe（+）表明复制处于较低水平，以荧光定量PCR法亦可判断体内HBV DNA复制水平。本实验证明，HBeAg（-）不能排除HBV DNA的复制。从表1可见，第一组与第二组及第四组，即HBeAg（+）与HBeAg（-）组比较，第一组HBV DNA阳性率除明显高于第二组外，同时明显高于第四组（P<0.01）。从HBV DNA定量水平，证实了HBeAg确实了是反映病毒复制的良好指标。HBVm全阴组测得HBV DNA阳性率为2%，表明该组患者并不能排除HBV感染，原因与ELISA对低含量者检测灵敏度不高或HBV发生基因变异有关 ［2］ 。ELISA检测肝炎病毒是目前最常用方法之一。但影响因素颇多，如加样时间，试剂平衡时间，样本溶血程度等等。特别是低浓度样本易导致假阴性结果，使弱阳性样本漏 检 ［3］ 。近年已有许多学者报道了HBsAg阴性与HBV感染，Pao等 ［］4 报道以PCR法检出HBsAg（-）组HBV DNA阳性检出率为11%。其中单抗-HBs者HBV DNA检出率为11.86%。本文实验报道仅2%，可能因为例数太少及全阴者未查HBV DNA之故。关于HBsAg（+）及其它单一阳性者，另一论文总结。
综上所述，乙型肝炎患者HBV荧光定量检测是病毒复制最直接可信的指标，动态荧光定量PCR检测HBV DNA对监测乙型肝炎感染的病情发展及抗HBV复制药物的疗效具有极重要的意义。对于HBVm全阴及单一抗HBs（+）者，观察其HBV DNA含量亦具有重要意义，有待进一步研究、探讨。
参考文献
1 张春兰，谢敏，蔡晓莉，等.定量聚合酶链反应检测肝病患者血清HBV DNA及治疗意义.临床肝胆病杂志，1999，15（3）:166-169.
2 Chao HLY，Hussain M，LoK ASF，Different hepatitis B Virus genotypes are associated with different mutation in the cove promoter and precore regions during hepatitis B antigen seroconversion，Hepatology，1999，29:976-984.
3 彭赛姣.弱阳性HBsAg的ELISA假阴性原因分析.临床检验杂志，2002，20（3）:191.
4 Pao CC，Yao DS，Lin CY，et al.Serumhepatitis B rirus DNA in hepatitis B Virus seropositive and seronegative patieats with normal liver func-tion.Am J clin pathol，1991，95（4）:591-596.
作者单位:435000湖北省黄石市中心医院检验科
