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北京航天总医院检验科 张霞 陈宝荣 孙璟 常晓鹏 毕蕊 刘爱民 |
| 【摘要】 目的 调查时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)在乙型肝炎血清学标志物检测中的应用情况。方法 采用AT-2000时间分辨荧光免疫分析仪及配套试剂对 180例正常人血清及46例乙型肝炎患者血清用TRFIA检测HbsAg、HbsAb、HbeAg、HbeAb及HbcAb，同时用AXSYM免疫分析仪微粒子酶免分析法（MEIA）进行检测。结果 46份患者血清TRFIA法检测结果同MEIA法比较，阳性符合率HBsAg 100%，HBsAb 93.02%，HBeAg 97.75%，HBeAb 90.25%，HBcAb 91.67%。灵敏度为HBsAg 100%，HBsAb 100%，HBeAg 100%，HBeAb 100%，HBcAb 96%。特异性为HBsAg100%，HBsAb 91%，HBeAg 100%，HBeAb 88%，HBcAb 90%。结论 时间分辨荧光免疫分析技术检测乙型肝炎血清学五项标志物，灵敏度高、稳定性好、经济、符合国情，可作为乙型肝炎病毒定量的一种常规方法。 【关键词】 时间分辨荧光免疫分析；乙型肝炎病毒 【Abstract】 Objective To research the application of the analysis technique of the time resolved fluoroimmuno assay in serum testing for the hepatitis B virus. Methods By AT-2000 time resolved fluoroimmuno assay instrument and reagents to examine 180 serum samples of normal people and 46 serum samples of patients for HBsAg, HBsAb, HBeAg, HbeAb and HbcAb and then compare the results with AXSYM MEIA's. Results For the results of 46 serum samples of patients, the positive compatibility rate of TRFIA method with MEIA method for HbsAg, HbsAb, HbeAg, HbeAb and HBcAb is 100%, 93.02%, 97.75%, 90.25% and 91.67%, respectively. Sensitivity is 100%, 100%, 100%, 100% and 96%, and specificity 100%, 91%, 100%, 88% and 90%. Conclusion The method of examining serological markers of hepatitis B virus by time resolved fluoroimmuno assay with high sensitivity and good stability is cost-effective and suitable for China's conditions, and can be used as a routine method of quantitative assay for hepatitis B virus. 【Key words】 Time resolved fluoroimmuno assay; hepatitis B virus 乙肝病毒(Hepatits B veius HBV)感染是我国最常见的感染性疾病之一，而应用免疫技术测定HBV特异性抗原抗体是HBV感染诊断的主要手段。由于免疫学技术的不断发展，抗原抗体检测灵敏度明显提高，使低水平HBV感染得以检出，对临床诊断及流行病学有重要意义[1] 。另外，由于可进行定量分析，这对药物疗效观察和病情监测具有重要意义[2] 。时间分辨荧光免疫分析技术(time resolved fluorecence immunanssay TRFIA)是一个灵敏度高、特异性强的新的免疫检测技术，本文应用这一技术对来我院就诊的HBV感染者及正常人进行了检测，并与Axsym微粒子酶免分析法(MEIA)进行了方法学比较，其结果如下： 一. 材料与方法 1. 标本来源: （1） 正常人血清：取自我院体检正常人群180份。 （2） 乙型肝炎患者血清：取自我院住院及门诊患者46份。 （3） 质控血清： ①卫生部临检中心质控血清（批号为0207）浓度分别为：0.2ng,0.5ng,1.0ng,5.0ng ②北京市临检中心质控血清（批号为0209）浓度分别为：2.0ng,5.0ng 2. 方法和试剂: （1） 参照方法：微粒子酶免分析法(MEIA)采用Axsym全自动免疫分析仪及配套试剂，为美国Abbott公司产品，试剂批号为 HBsAg 91046LU00. HBsAb 89348LU01. HBeAg 88314HP00. HBeAb 84053HP00. HBcAb 88058LU00. （2）测试方法：时间分辨免疫荧光分析法(TRFIA)采用AT-2000时间分辨荧光免疫分析仪及配套试剂，为上海新波生物技术有限公司产品。试剂批号乙肝两对半均为20020726. 二. 结果与分析： 1． HBsAg TRFIA cut off值HBsAg浓度≥0.5ng/ml 为阳性， MEIA cut off值HBsAg浓度S/N>2.0为阳性，其二法定性结果见表1 |
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表1 TR-FIA和MEIA检测定性结果四格表 |
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灵敏度46/(0+46)*100%=100% 特异性46/(46+0)*100%=100% 诊断符合率100% |
| 使用TRFIA 方法对本地区180例正常人进行HbsAg测定，结果呈正态分布:均值0.12.标准差0.062。该调查结果符合中国药品生物制品检验所规定最低检出量0.5ng/ml。并与Abbott公司配套肝炎诊断方法（MEIA）比较，相关系数为0.833,具有较好相关，该法检测灵敏度为0.36ng/ml。卫生部临检中心1ng/ml质控血清对照:均值1ng/ml.标准差0.15.变异系数15%。 ELISA方法及金标法检测灵敏度分别为0.5ng/ml和5ng/ml。提示该法与MEIA的灵敏度相似，能检测到低浓度之HBsAg,初步解决了隐源性肝炎中HBV标志检测的问题。[1] 2． HBsAb TRFIA cut off值的HBsAb浓度≥10mIU/ml时为阳性， MEIA cut off值的HBsAb浓度>10mIU/ml时为阳性，其二法定性结果见表2 |
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表2 TRFIA和MEIA检测抗HBs定性结果四格表 |
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灵敏度 22/(22+0)*100%=100% 特异性 64/(6+64)*100%=91% 诊断符合率 91% |
| 3.HBeAg： TRFIA cut off值HBeAg的浓度>0.03NCU/ml为阳性, MEIA cut off值HBeAg的浓度 S/CO>1.0为阳性,其二法定 性结果见表3 |
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表3 TRFIA和MEIA检测HBeAg定性结果四格表 |
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灵敏度 30/(30+0)*100%=100% 特异性 58/(0+58)*100%=100% 诊断符合率97.7% |
| 4. HBeAb： TRFIA cut off值 HBeAb>1.5NCU/ml为阳性， MEIA cut off值 HBe Ab S/N<1.0，其二法定性结果见表4 |
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表4 TRFIA和MEIA检测HBeAg的定性结果四格表 |
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灵敏度 22/(22+0)*100%=100% 特异性 60/(8+60)*100%=88% 诊断符合率 91% |
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5. HBcAb： TRFIA cut off值HBcAb>0.1NCU/ml 为阳性, MEIA cutoff值HBcAb S/N<1.0 为阳性,其二法定性结果见表5。 |
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表5 TRFIA和MEIA检测HBcAb定性结果四格表 |
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灵敏度 60/(60+2)*100%=96% 特异性 24/(2+24)*100%=92% 诊断符合率 95.5% |
| HbcAb抗体均按1：30倍稀释后，检测基本符合感染后的血清学标志物模式。 |
| 三．讨论: AXSYM免疫分析仪微粒子酶免分析法(MEIA)检测HBV感染血清学标志物是公认的诊断HBV感染的方法。特点是：全自动，操作时环境不易被污染，但成本较高。目前国内检测HBV感染血清学标志物应用较多的仍是ELISA方法。其有以下缺点：1.无法定量；2.灵敏度低；3.由检测原理带来的前带现象无法解决；4.易污染，无法完成HBV感染的动态观察以及低水平HBV感染指标检测。免疫胶体金检测技术可大大缩短检测时间，不需要特殊设备，操作简单，但灵敏度欠佳，假阳性问题难以克服。 用TRFIA法做了46例乙型肝炎患者血清学标志物，其结果同时与MEIA法进行比较符合率分别为HBsAg 100%,HBsAb 93.02%,HBeAg 97.75%,HBeAb 90.25%,HBcAb 91.67%。 时间分辨免疫分析技术(TRFIA)是近年发展起来的无环境污染的高灵敏度免疫标记检测技术，因稀土离子本身激发光谱宽荧光发射光谱窄，使这一精密检测技术在普通实验室能够进行。它以稀土离子为标记物，通过时间延迟，去除非特异性荧光干扰，在固定时间检测特异性荧光，解决了自然背景干扰问题，明显提高检测灵敏度。并通过激发光与发射光之间较大的STOKES位移，明显排除非特异性荧光的干扰，提高了光谱的分辨率，使特异性明显增强。它与目前所使用的HBV感染标志物检测方法比较，是一种新的检测方法，灵敏度高、稳定性好、经济实用、符合国情。 参考文献 [1] 魏来 陶其敏 努力规范肝脏疾病的免疫学诊断. 中华检验杂志,2003,26:69-71 [2] Heijtink RA, Kruining J, Honkoop P, et al. Serum HbeAg quantitation during antiviral therapy for chronic hepatitis B.J Med Virol,1997,53:282-287. [3] 陈永伟 抗HBc时间分辨荧光免疫分析方法的建立. 临床检验杂志,2002,20,5: [4] 秦卫仕,田蓉, 时间分辨荧光免疫分析方法学评价. 免疫学杂志.2002,5: 丛玉隆,王丁,主编..当代检验分析技术与临床. 北京:中国科学技术出版社,2002.289-310. |
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