[摘要] 目的：用FQ-PCR检测血样中乙型肝炎病毒DNA拷贝数，了解用ELISA法检测HBV-M不同的标志物组合时，其对应的HBV-DNA阴、阳性及阳性的拷贝数。方法：采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测234例血样。结果：97例HBsAg（+）、HBeAg（+）、抗-HBc（+），其HBV-DNA阳性为96例，定量结果对数值的靶值为7.91；60例HBsAg（+）、抗-HBe（+）、抗-HBc（+），其HBV-DNA阳性为37例，定量结果对数值的靶值为4.73；13例抗-HBc（+），其HBV-DNA阳性为2例，定量结果对数值的靶值为3.22；而4例HBV-M全（-）的HBV-DNA也全（-）。结论：FQ-PCR能快速、特异、灵敏地定量检测血液及各种体液中病原体的DNA或RNA，对疾病的诊断，治疗过程的监测，愈后监控及药效评价等都具有很高的实用价值。
[关键词]：乙肝病毒（HBV）及其血清学标志物（HBV-M）；荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）；酶联免疫吸附试验（ELISA）
临床常用ELISA法进行HBV-M的检测和PCR法进行HBV-DNA的定性检测来判断HBV的感染或疗效。FQ-PCR是在定性PCR基础上，增加了一条荧光探针，并标记荧光报告基团（R）和荧光淬灭基团（Q）。当荧光探针保持完整时，R的荧光信号被Q所淬灭；而在PCR反应中，Taq酶将探针切断，R释放出荧光信号，检测其荧光信号强弱，可反映HBV-DNA的浓度。并且因为FQ-PCR克服了定性PCR的易污染、假阳性高、操作者要接触强致癌物等不足，整个操作过程仅需开盖一次，因而其临床应用越来越广泛。本文采用FQ-PCR法和ELISA法对照检查了234例标本，现将结果报告于下。
1 材料与方法
1.1 标本来源
2001年10～12月，本院门诊和住院部的234例患者，男132例，女102例，年龄7岁～71岁。清晨空腹静脉取血2ml送检。
1.2 仪器、试剂与方法
酶标仪是荷兰We11scan MK3,洗板机是荷兰We11wash4，ELISA试剂是上海荣盛公司提供，并严格按照其说明书操作。基因扩增仪是日本Life Express品牌，微量荧光检测仪是上海棱光公司DA620型，FQ-PCR检测HBV-DNA试剂是广州中山大学达安基因公司提供，并严格按照说明书操作。
2 结果
ELISA法检测HBV-M时，以HBsAg为1，抗-HBs为2，HBeAg为3，抗-HBe为4，-HBc为5。结果见表1。
表1 HBV-DNA定量结果与HBV-M检测结果比较
| 组别 | 例数 | HBV-M阳性 | HBV-DNA阳性（率） | HBV-DNA阳性定量结果对数值（X+/-S） |
| 1 | 97 | 1，3，5 | 96（99%） | 7.91+/-1.13 |
| 2 | 60 | 1，4，5 | 37（61.7%） | 4.73+/-0.94 |
| 3 | 12 | 1，5 | 4（33.3%） | 4.01 |
| 4 | 17 | 1 | 4 （23.5%） | 3.61 |
| 5 | 11 | 2，5 | 1 （9.1%） | 3.16 |
| 6 | 9 | 1，3 | 8 （88.9%） | 6.94 |
| 7 | 7 | 1，4 | 2 （28.6%） | 3.87 |
| 8 | 13 | 5 | 2 （15.4%） | 3.22 |
| 9 | 7 | 2 | 0 （0%） | 0 |
| 10 | 1 | 3，5 | 1 （100%） | 8.17 |
| 合计 234 155（66.2%） | ||||
3 讨论
用ELISA法作HBV-M是临床应用最广泛的诊断HBV感染，评价HBV传染性及愈后的手段。本文中，组别1（俗称大三阳），其FQ-PCR法的HBV-DNA阳性率达99%，定量结果对数值高达7.91，表明HBV-DNA复制活跃，HBV浓度高，传染性很强。组别2（俗称小三阳），其FQ-PCR法的HBV-DNA阳性率为61.7%，定量结果对数值为4.73，相对于组别1而言，其HBV-DNA复制欠活跃，HBV浓度稍低一些，传染性也稍差一些。
FQ-PCR法检测HBV-DNA的阳性率与HBV-M的HBeAg的阳性有很好的伴随关系。从组别1和组别6可以看出：当HBeAg（+）时，HBV-DNA的阳性率分别为99%和88.9%，且定量结果对数值为7.91和6.94。组别10的定量结果对数值更高达8.17。这3组的定量结果对数值与其余各组的值，分别作采用成组设计的两样本均数比较的t检验统计学处理，发现有显著性差异。当HBeAg（+）时，HBV-DNA却为（-），可能的原因是：药物使HBV-DNA复制受抑制或试验中样本HBV-DNA丢失或与引物对应的DNA序列变异。
在所有HBsAg（+）202例中，FQ-PCR法HBV-DNA阳性151例，阳性率74.8%。阴性的51例中有7例是在半年到2年前乙肝大三阳（当时未作HBV-DNA定量），接受贺普丁或干扰素治疗后再测HBV-DNA定量的。51例阴性的可能原因是HBV-DNA整合到宿主细胞内或PCR引物与HBV-DNA不匹配或HBV-DNA基因发生变异或生物疗法抑制或掩盖了HBV-DNA的复制。
组别10是HBeAg（+），抗-HBc（+），但HBV-DNA定量结果很高，其定量结果对数值高达8.17。但对该标本稀释20倍后再用ELISA法测HBV-M，结果是HBsAg（+），证实是HOOK现象。
参考文献
[1] 徐志学，李东进. 中华肝病学会肝脏病杂志，1995，3：74.
[2] 戴晨阳，戴晨琳. 天津医药，1999，27（9）：515.
[3] 程钢，何蕴韶，周新宇. 中华医学检验杂志，1999，22（3）：135.
作者单位：414000 岳阳 湖南省岳阳市第二人民医院
